[发明专利]一种动物源性食品中孟布酮残留检测方法

权利要求书

1.一种动物源性食品中孟布酮残留检测方法，其特征在于,具体步骤如下：

S1试样的制备：选取样品组织为适量新鲜或解冻的样品组织，切碎缩分后绞碎，装入洁净的样品袋内-18℃冷冻存储待测；样品组织为猪油、猪肉和猪肾中的一种；

S2试样的称量和提取：称取试样至离心管内，加入乙腈，涡旋混合，振荡提取后取出，离心；移取上清液到另一塑料离心管内；残渣中加入乙腈重复提取一次，合并乙腈层；

S3净化：加入正己烷，涡旋离心，把正己烷层弃去；

S4 LC-MS/MS检测：在40℃水浴下，用氮气把提取液吹干，1mL30%乙腈超声溶解残渣，过0.22μm有机系滤膜后，装入进样小瓶内，待LC-MS/MS检测；测得样品液中孟布酮的色谱峰面积，代入标准工作曲线，得到样品液中孟布酮含量，根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中孟布酮含量；

LC-MS/MS的色谱条件为色谱柱： Waters HSS PFP 3.0×100mm 1.8μm ；柱温：40℃；进样体积：5μL； 流动相：A:纯水，B: 乙腈 ；流速：0.5 mL/min；梯度程序：0-0.50min，A：70.0%-70.0%；0.50-2.50min，A：70.0%-5.0%；2.50-4.00min，A：5.0%-5.0%；4.00-4.50min，A：5.0%-70.0%；4.50-6.00min，A：70.0%-70.0%；质谱参数为气帘气(CUR):30，碰撞气（CAD）：9；雾化器温度:600℃；离子源气体1为55；离子源气体2为60；毛细管电压:-4500V；MRM选择离子模式；孟布酮的母离子为257.1 m/z，子离子为213.0 m/z、197.0 m/z、198.0 m/z和182.0 m/z，驻留时间为100ms，碰撞电压分别为-15V、-29V、-21V和-55V，去簇电压为-180V，其中257.1 m/z为定量离子。

2.根据权利要求1所述的一种动物源性食品中孟布酮残留检测方法,其特征在于, 所述步骤S2中的称取试样1g到15mL塑料离心管内，加入5mL乙腈，涡旋混，在高速组织研磨机上13000r/min振荡提取2min；取出，转速8000r/min，离心3min；移取上清液到另一15mL塑料离心管内；残渣中加入5ml乙腈重复提取一次，合并乙腈层。

3.根据权利要求1所述的一种动物源性食品中孟布酮残留检测方法,其特征在于, 所述步骤S3中的加入5mL正己烷，涡旋1min，转速8000r/min，离心3min，把正己烷层弃去。

4.根据权利要求1所述的一种动物源性食品中孟布酮残留检测方法,其特征在于，还包括S5空白试验：不称取试样的情况下，重复S2至S4。

5.根据权利要求1所述的一种动物源性食品中孟布酮残留检测方法,其特征在于，所述标准工作曲线的配制过程，包括以下具体步骤：

T1标准储备液：准确称取10mg标准物质，用少量乙腈溶解后，用乙腈定容至10.0 mL，配成1000 mg/L标准储备液，于-20℃避光存储；

T2标准中间液A：用移液枪分别准确移取0.01 mL标准储备液，用乙腈定容到10.0 mL，得到1.0 mg/L中间标准混合溶液，-4℃避光存储，有效期1个月；

T3系列校准溶液：分别移取0μL、5μL、10μL、30μL、50μL、80μL、100μL和150μL体积的标准中间液A，用乙腈定容至1000μL，得到系列校准溶液；上机LC-MS/MS检测，该溶液现用现配，以分析物的峰面积为纵坐标y，质量浓度为横坐标x，绘制标准工作曲线。

6.根据权利要求5所述的一种动物源性食品中孟布酮残留检测方法,其特征在于,还包括S6添加试验：添加水平10μg/kg、20μg/kg、50μg/kg，称取试样后，分别准确加入标准中间溶液A10μL、20μL、50μL充分混匀后，所有步骤同重复S2至S4，10μg/kg、20μg/kg、50μg/kg水平添加分别做6个平行。

7.根据权利要求5所述的一种动物源性食品中孟布酮残留检测方法,其特征在于,还包括S7基质匹配校准曲线的制备：选取阴性样品分别称取8份试样，分别准确加入标准中间溶液A0μL、5μL、10μL、20μL、50μL、80μL和100μL充分混匀后，所有步骤同重复S2至S4；得到0、5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、80μg/L和100μg/L系列基质匹配校正溶液。