[发明专利]一种适合饲料高温制粒的内切β-葡聚糖酶的构建方法在审
| 申请号： | 202210671819.5 | 申请日： | 2022-06-14 |
| 公开（公告）号： | CN114958809A | 公开（公告）日： | 2022-08-30 |
| 发明（设计）人： | 游锡火;王玉万;胡燕;梁大明;曾徐浩;夏胜;薛栋升;蒋慧;田美华;姜本荣;齐义清;沈力 | 申请（专利权）人： | 中农华威生物制药（湖北）有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/24 | 分类号： | C12N9/24;C12N15/70;A23K20/189;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 田立媛 |
| 地址： | 435300 湖北省黄冈市蕲*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 适合 饲料 高温 聚糖 构建 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种适合饲料高温制粒的内切β-葡聚糖酶的构建方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)目的基因扩增
以Primer-F和Primer-R为引物，以合成的β-葡聚糖酶基因序列SEQ ID NO.1为模板进行PCR扩增，获得目的基因；
(2)酶切、连接和转化
将步骤(1)获得的目的基因和pRSFduet-1表达载体分别进行双酶切，经连接，获得质粒pRSFduet-1-SQ，转化大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞；
(3)利用IPTG诱导目的基因的表达，经超声破碎获得蛋白粗酶液；
(4)采用Ni-NTA纯化介质对蛋白粗酶液进行纯化，分析酶活性。
2.根据权利要求1所述的一种适合饲料高温制粒的内切β-葡聚糖酶的构建方法，其特征在于，步骤(1)所述Primer-F和Primer-R的引物序列如下：
Primer-F：5’-GGGATCCATGCGTTCTCTGCC-3’；SEQ ID NO.3；
Primer-R：5’-CGAATTCTTAATGATGGTGGT-3’；SEQ ID NO.4。
3.根据权利要求1所述的一种适合饲料高温制粒的内切β-葡聚糖酶的构建方法，其特征在于，步骤(2)所述双酶切所用的酶为BamH I和EcoR I。
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