[发明专利]一种炭角菌胞外多糖及低共熔溶液提取方法

说明书

本发明涉及多糖提取技术领域，且公开了一种炭角菌胞外多糖低共熔溶液提取方法，包括以下步骤：在漏斗中放入滤纸，将炭角菌发酵液10～15份使用滤纸进行过滤分离出菌体，得到过滤液；称取尿素7～10份与氯化胆碱5～7份放入到蓝口瓶中，加入蒸馏水，进行加热搅拌，制备出低共熔溶剂；将滤液与低共熔溶液混合搅拌，静置6h后进行离心，得到上层清液。该炭角菌胞外多糖及低共熔溶液提取方法，使用具有更多羟基的尿素制备低共熔溶剂相比与其他低共熔溶剂的氢键供体，尿素对于蛋白质的溶解性更好，沉淀蛋白质的速率更快，价格更为低廉，同时，利用尿素制备的低共熔溶剂提取胞外多糖，操作更为简便，对实验设备要求较低。

技术领域

本发明涉及多糖提取技术领域，具体为一种炭角菌胞外多糖及低共熔溶液提取方法。

背景技术

胞外多糖是一些特殊微生物在生长代谢过程中分泌到细胞壁外、易与菌物的生长有体分离、分泌到环境中的水溶性多糖，属于微生物的次级代谢产物，对微生具有重要意义。炭角菌是Xylaria属的微生物，其发酵中可以分泌出大量的胞外多糖。

现有技术中，在提取炭角菌胞外多糖时，使用的低共熔溶剂的氢键供体，溶解性较差，沉淀蛋白质的速率较慢，并且价格昂贵，其次在提取过程中，操作复杂，对实验设备要求较高，因此需要发明出一种炭角菌胞外多糖及低共熔溶液提取方法来解决上述问题。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种炭角菌胞外多糖及低共熔溶液提取方法，使用具有更多羟基的尿素制备低共熔溶剂相比与其他低共熔溶剂的氢键供体，尿素对于蛋白质的溶解性更好，沉淀蛋白质的速率更快，价格更为低廉，同时，利用尿素制备的低共熔溶剂提取胞外多糖，操作更为简便，对实验设备要求较低。

(二)技术方案

为实现上述操作简便、价格低廉的效果，本发明提供如下技术方案：一种炭角菌胞外多糖，以炭角菌发酵液10～15份为原料进行低共熔溶液提取得到。

优选的，所述低共熔溶液包括以下原料，尿素7～10份、氯化胆碱5～7份、盐酸溶液5～10份、饱和食盐水10～15份、乙醇溶液20～30份、丙酮溶液20～30 份。

优选的，所述乙醇溶液20～30份中乙醇的体积含量要求在90％以上，所述盐酸溶液5～10份的pH值为4.5～5。

一种炭角菌胞外多糖低共熔溶液提取方法，包括以下步骤：

S1、在漏斗中放入滤纸，将炭角菌发酵液10～15份使用滤纸进行过滤分离出菌体，得到过滤液；

S2、称取尿素7～10份与氯化胆碱5～7份放入到蓝口瓶中，加入蒸馏水，进行加热搅拌，制备出低共熔溶剂；

S3、将步骤S1中的滤液与步骤S2中的低共熔溶液混合搅拌，静置6h后进行离心，得到上层清液；

S4、向步骤S3中的上层清液中加入盐酸溶液将pH值调节为6，再加入饱和食盐水10～15份混合搅拌，将混合液进行再次离心，取上层清液；

S5、向步骤S4中的上层清液放入烧杯中，并使用磁力搅拌机进行搅拌，在搅拌过程中加入乙醇溶液20～30份，使用酒精计测量酒精度，直至步骤S4 中的上层清液酒精度在80以上，将溶液封口静置3h，取下层沉淀使用丙酮溶液20～30份进行漂洗，最后将漂洗的沉淀干燥得到炭角菌胞外多糖。

优选的，所述步骤S1中，使用三层滤纸的一侧对炭角菌发酵液10～15份进行过滤，且过滤之前需对炭角菌发酵液10～15份进行静置沉淀。

优选的，所述步骤S2中，加热温度为60℃，搅拌转速为1250rpm，且加热搅拌时间为30min。

优选的，所述步骤S4中，盐酸溶液5～10份需要少量多次的添加，且在添加过程中，需要不停搅拌。