[发明专利]编码人OTOF的核酸序列及其应用

说明书

本发明提供了OTOF编码优化序列，通过优化序列在细胞中的表达效果比天然OTOF序列提高3倍以上。此编码优化序列可用于蛋白的表达及病毒包装。

技术领域

本发明属于基因治疗领域，编码人OTOF蛋白的核酸序列，相比于OTOF的天然序列，能够显著提高OTOF的表达量。

背景技术

耳是人体的重要器官，由外耳、中耳和内耳构成，其主要功能是感知声音和维持身体平衡。当耳功能异常时会导致一系列身体机能的病变，包括耳聋，耳鸣，眩晕等。

耳聋是一种听觉功能异常的常见疾病，可分为先天性耳聋和后天性耳聋，多与遗传因素和环境因素相关。每1000个新生婴儿中就有2位先天性耳聋，其中50-60%患者的耳聋均由基因突变引起；基因突变导致的耳聋可分为显性基因突变和隐性基因突变。其中，隐性耳聋基因包括CLDN14，PJVK，GRXCR1，MYO7A，MYO6，MYO3A，MYO15A，OTOF，OTOG，OTOA，STRC，TMC1，SLC22A4，SLC26A4，SLC26A5，TECTA，GJB2和GJB6等。这些耳聋基因的发现为遗传性耳聋的精准治疗提供潜在的靶点，因此当上述基因引发耳聋时，基因治疗可以作为耳聋根治的首选策略。

其中，OTOF在听力中发挥了重要作用。OTOF蛋白主要表达在耳蜗的内耳毛细胞中，主要作用是结合钙离子（Ca²⁺），并启动下游神经递质的释放。OTOF基因的缺失或功能丧失性突变会引起DFNB9耳聋。

通过过表达正常功能的OTOF蛋白来恢复OTOF突变引起的耳聋是目前治疗OTOF突变耳聋的主要思路，但其中会遇到表达效率低的问题。为了提高OTOF的表达效率，本发明提供了OTOF的优化序列，使得OTOF蛋白表达量提升3倍以上。

发明内容

本发明提供了编码人OTOF的核酸序列，相比于天然OTOF序列的蛋白表达量有显著提升。

该序列可以以DNA的形式构建到蛋白表达质粒中，在相适应的宿主中进行蛋白表达，包括大肠杆菌；昆虫细胞；哺乳动物细胞系 ，包括但不限于CHO，HEK-293T，HEK-293FT等。

该序列可以以DNA的形式构建到病毒包装载体中，包括但不限于腺相关病毒，腺病毒及慢病毒等。

该序列可以以RNA的形式制备并包裹到脂质纳米颗粒中。

附图说明：

图1 OTOF-Opt图谱；

图2 OTOF-Nat图谱；

图3 OTOF蛋白的表达；

图4 蛋白表达的定量分析的结果;

具体实施方式：

为了使本申请的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本申请进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利，并不用于限定本发明。

本发明涉及OTOF核苷酸序列，通过该核苷酸序列翻译得到的蛋白质与Uniprot数据库Q9HC10-5相同。

该核苷酸具体的应用包括：

该序列可以以DNA的形式构建到蛋白表达质粒中，在相适应的宿主中进行蛋白表达，包括大肠杆菌；昆虫细胞；哺乳动物细胞系 ，包括但不限于CHO，HEK-293T，HEK-293FT等。