[发明专利]一种山羊PIS基因型检测方法

说明书

本发明公开了一种山羊PIS基因型检测方法，属于生命科学领域。包括：4对特异性引物：SRYF和SRYR；PISwtF和PISwtR；PISvar‑1F和PISvar‑1R；PISvar‑2F和PISvar‑2R；探针。还提供了具体的检测方法和检测标准。本发明首次将高灵敏度的PCR方法和高稳定性的SouthernBlot方法结合起来，开发出简便高效的诊断山羊PIS基因型的检测方法，具有很高的特异性，且方便快捷，可用于准确鉴定PIS基因的基因型，指导山羊的选种和选配，根据育种者的需求控制或调整山羊群体中PIS基因的基因型频率，提高山羊养殖的经济效益。

技术领域

本发明涉及生命科学技术领域，更具体的说是涉及一种山羊PIS基因型检测方法。

背景技术

羊角是山羊的标志性特征之一，但并非经济性状。在现代畜牧业养殖中，有角山羊打斗明显且占有优势地位，饲喂时抢料严重，而且打斗还会造成流产甚至骨折、乳房撕裂等情况，而无角山羊与有角山羊相比不仅减少了个体之间相互争斗带来的经济损失，而且也有利于对家畜的大批量圈养，更利于养殖和管理。因此，培育无角山羊品系已经成为羊育种领域的重要方向。

间性是指某些雌雄异体动物兼有两性特征的现象。而山羊的间性是指与无角性状紧密相关的雌性性反转，又称为无角间性综合征(Polled intersex syndrome,PIS)。这种复杂的因果变异被认为是由于先前报道的山羊1号染色体上发生变异等等，这种复杂的因果变异在国内的崂山奶山羊、唐山奶山羊和金堂黑山羊等品种中也是如此。说明早期对于检测山羊PIS基因型的方法都存在重大缺陷，往往是盲人摸象、缘木求鱼，不得要领。

山羊的间性性状是由于1号染色体PIS区隐性突变所致。因此，在对山羊进行繁育时若不通过一些生物学手段将PIS杂合突变体加以排除，将导致后代群体中间性基因频率越来越高，同时间性山羊的发生率也将随之增加，给养羊业造成严重的经济损失。目前已有的间性山羊检测方法包括染色体核型分析法、PCR等。染色体核型分析法因其操作复杂、难度大且对于微小缺失等病变无法检测，难以提供染色体变异点的精确定位。PCR检测方法存在可靠性低，引物特异性、扩增效率和稳定性低等问题。

另外，荧光原位杂交技术使用特异性探针同细胞分裂中期的染色体杂交，能检测到PIS染色体结构变异，但由于工作量十分巨大，且费用较高，一般较少采用。

因此，能否将高灵敏度的PCR方法和高稳定性的Southern Blot方法结合起来，开发出简便高效的诊断山羊PIS基因型的检测方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种山羊PIS基因型检测方法。可用于准确鉴定PIS基因的基因型，指导山羊的选种和选配，根据育种者的需求控制或调整山羊群体中PIS基因的基因型频率，提高山羊养殖的经济效益。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种山羊PIS基因型检测引物、探针组，包括：4对特异性引物：SRY F和SRY R；PISwt F和PIS wt R；PIS var-1F和PIS var-1R；PIS var-2F和PIS var-2R；探针；

SRY F：5’-GGGGCAATCGTATGCTTCT-3’如SEQ ID No.1所示；

SRY R：5’-CGGGTATTTGTCTCGGTGT-3’如SEQ ID No.2所示；

PIS wt F：5’-CTTGTGCCTCTTAGTCCTG-3’如SEQ ID No.5所示；

PIS wt R：5’-ACATAGAATGCCCTGGTG-3’如SEQ ID No.6所示；