[发明专利]一种山羊PIS基因型检测方法

权利要求书

1.一种山羊PIS基因型检测引物、探针组，其特征在于，包括：4对特异性引物：SRY F和SRY R；PIS wt F和PIS wt R；PIS var-1 F和PIS var-1 R；PIS var-2 F和PIS var-2 R；探针；

SRY F：5’-GGGGCAATCGTATGCTTCT-3’如SEQ ID No.1所示；

SRY R：5’-CGGGTATTTGTCTCGGTGT-3’如SEQ ID No.2所示；

PIS wt F：5’-CTTGTGCCTCTTAGTCCTG-3’如SEQ ID No.5所示；

PIS wt R：5’-ACATAGAATGCCCTGGTG-3’如SEQ ID No.6所示；

PIS var-1 F：5’-ATTTGCTGGCGTATTGAGTG-3’如SEQ ID No.7所示；

PIS var-1 R：5’-AAGACGGTAGGTTCTGTGGG-3’如SEQ ID No.8所示；

PIS var-2 F：5’-TCATAGGCCATAGCTAAATGGT-3’如SEQ ID No.9所示；

PIS var-2 R：5’-GAGACAGGCTGAATGTGCAA-3’如SEQ ID No.10所示；

探针：5’-TCATAGGCCATAGCTAAATGGTACTTAGAGAAATTTTTATAGATTTAAATACATTCATCAGACTACAAATGAAGTGTAGGCATTAAAATTAAGAAACTTGAAGAATGTGTATGTACTTCCAAAGCAAAAATAAGAAAAATAAGGGTATAACTCGCTTCTAGGGACTCAGGGGCAGTCTAATTTTCAAGCACTGAGAAGCCCAGATTAGTCTAATCAGTGCAAGCCTGTCTTTCAGTCCATTTAAAGATCCTTTGCACATTCAGCCTGTCTC-3’如SEQ ID No.11所示。

2.根据权利要求1所述的一种山羊PIS基因型检测引物、探针组，其特征在于，还包括特异性引物对GAPDH F和GAPDH R；

GAPDH F：5’-GTTTGTGATGGGCGTGAA-3’如SEQ ID No.3所示；

GAPDH R：5’-CTGTTGCTGTAGCCGAAT-3’如SEQ ID No.4所示。

3.一种基于权利要求1或2所述检测引物、探针组的试剂盒。

4.一种基于权利要求1或2所述检测引物、探针组或权利要求3所述的试剂盒在畜牧养殖中的应用。

5.一种基于权利要求2所述检测引物、探针组的山羊PIS基因型检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)引物设计：包括遗传性别判定引物和PIS基因型鉴定引物；

(2)进行遗传性别和PIS基因型鉴定；

(3)制备探针并进行Southern杂交检测。

6.如权利要求5所述的山羊PIS基因型检测方法，其特征在于，步骤(2)包括：样本基因组DNA的提取；遗传性别鉴定引物SRY-F/R、GAPDH-F/R的PCR扩增；PIS基因型鉴定引物PISwt F/R、PIS var-1F/R的PCR扩增；所述扩增采用25μL体系：1.1×Golden Star Super PCRMix 22μL，模板DNA 1μL，上下游引物各1μL；反应程序：95℃预变性5min，95℃变性30s，退火30s，72℃延伸30s，循环34次，72℃复性5min，4℃保存。