[发明专利]细胞因子融合蛋白的ADA分析方法

权利要求书

1.细胞因子融合蛋白的ADA分析方法，其特征在于包括以下步骤：

S1.将样品酸化处理；

S2.将酸化样品经中和后在抗原包被的酶标板上孵育，形成Drug-ADA免疫复合物；

S3.将Drug-ADA免疫复合物从酶标板上酸化洗脱；

S4.将洗脱物与Master-mixture工作液孵育，形成Biotin-Drug-ADA-Drug-Sulfo复合物；

S5.将Biotin-Drug-ADA-Drug-Sulfo复合物加至MSD板上孵育；

S6.测量与MSD板结合的复合物的可检测发光信号，发光信号值与样品中ADA浓度成正比。

2.根据权利要求1所述的细胞因子融合蛋白的ADA分析方法，其特征在于：S1中酸化处理具体为：将样品经封闭缓冲液稀释后，加入酸性溶液，在室温，500-800rpm转速下，酸化反应10-30min。

3.根据权利要求1所述的细胞因子融合蛋白的ADA分析方法，其特征在于：S2中抗原包被的酶标板上的抗原为细胞融合蛋白。

4.根据权利要求1所述的细胞因子融合蛋白的ADA分析方法，其特征在于：S2中中和处理具体为：1M Tris溶液与酸化样品的体积比为1:10混合。

5.根据权利要求2所述的细胞因子融合蛋白的ADA分析方法，其特征在于：S3中酸化洗脱具体为：向酶标板上加入酸性溶液，在室温，500-700rpm下，酸化反应10-30min。

6.根据权利要求5所述的细胞因子融合蛋白的ADA分析方法，其特征在于：S1和S3中酸化处理中采用的酸性溶液包括但不限于醋酸溶液、甘氨酸-HCl缓冲液。

7.根据权利要求1所述的细胞因子融合蛋白的ADA分析方法，其特征在于：S4中Master-mixture工作液采用如下方法制得：将生物素标记抗原、钌标记抗原用Tris-BSA溶液稀释至浓度比为(0.1-1)μg/mL：(0.1-1)μg/mL。

8.根据权利要求1所述的细胞因子融合蛋白的ADA分析方法，其特征在于：S5中孵育条件：将Master-mixture工作液和洗脱物加置稀释板，在室温，120-200rpm转速下，孵育1-3h。

9.根据权利要求1所述的细胞因子融合蛋白的ADA分析方法，其特征在于：S5中洗涤孵育后的MSD板以去除未结合的复合物，然后进入S6。