[发明专利]一种胺类物质的测定方法

说明书

本发明涉及一种胺类物质的测定与控制方法。该方法通过在高效液相色谱仪上采用反相色谱分离，采用蒸发光散射检测器对胺类物质进行检查。采用该方法能有效测定胺类物质的含量，具有专属性好、灵敏度高、分析时间短、检测结果准确度高的特点。

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体而言，本发明涉及一种采用HPLC-ELSD（高效液相色谱-蒸发光散射检测器）检测胺类物质的方法。

背景技术

胺类物质，如乙二胺、二乙胺、三乙胺等及其衍生物是药物合成中常用的溶剂。乙二胺在药物中常被用作助溶剂和pH值调节剂，其含量需要进行研究并采取适当方法进行控制。现有文献报道中，采用气相色谱法和离子色谱法测定乙二胺含量。但是采用气相色谱法测定时，存在进样重复性较、峰型差、色谱柱耐用性差等原因，难以满足分析的要求，而离子色谱价格昂贵，目前还未大量普及。

CN111721847A1.公开一种HPLC检测药品中乙二胺含量的方法，该方法包括采用乙二胺与衍生试剂反应制备得到衍生对照品溶液和供试品溶液；然后用高效液相色谱法检测衍生对照品溶液和衍生供试品溶液。

由于现有检测胺类物质的方法要么采用气相色谱，要么采用柱前衍生化的HPLC法，不但耐用性差，而且衍生化也比较烦杂，因此有必要开发一种耐用性好，灵敏度更高，无需衍生化的方法。

目前，尚未发现测定这些胺类物质的HPLC-ELSD法。本发明人在研究这些胺类物质的过程中，发现ELSD对这些胺类的检测具有极高的灵敏度，进而开发了一种HPLC-ELSD测定胺类物质的方法，极大的改进了当前已有测定方法的缺陷。

发明内容

本发明提供了一种胺类物质的检测方法，包括采用HPLC-ELSD（高效液相色谱-蒸发光散射检测器）法检测胺类物质。该方法改进了现有检测方法存在的缺陷。

在一实施方案中，本发明的一种胺类物质的检测方法，包括采用HPLC-ELSD进行测定，其中，色谱柱的填充剂为十八烷基键合硅胶或辛烷基键合硅胶，流动相A为三氟乙酸溶液，流动相B为乙腈-水-甲酸或乙酸，采用梯度洗脱。

上述本发明的检测方法，所述胺类物质选自甲胺、乙胺、乙二胺、二乙胺、三乙胺及其衍生物中的一种或多种，所述衍生物优选为异丙胺或羟乙基乙二胺，所述流动相A或流动相B中，三氟乙酸、甲酸或乙酸的浓度为0.01%~2%。

上述本发明的检测方法，所述采用梯度洗脱，0~3min内梯度中水相比例不低于60%，其具体梯度变化如下：

上述本发明的检测方法，其色谱条件为：进样量为1~100μl，流速为0.3~1.0ml/min，或柱温为15~45℃，所述色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18，4.6×150mm，3.5μm，流动相A为0.2%三氟乙酸溶液，或流动相B为乙腈-水-甲酸=850：150：1v/v，所述ELSD，蒸发光散射检测器漂移管温度为60~105℃，或载气流速为1.0~3.0L/min。

优选的，上述本发明的检测方法，所述进样量为10μl，所述流速为1.0 ml/min，所述柱温为35℃，所述蒸发光散射检测器漂移管温度为95℃，所述蒸发光散射检测器载气流速为3.0L/min。

上述本发明的检测方法，对照品溶液浓度范围在1μg/ml~1mg/ml，稀释剂为水、甲醇、乙腈、乙醇、异丙醇或它们两种及以上的混合物。

上述本发明的检测方法，所述对照品溶液：取各待测胺类对照品溶液，配制成浓度约为1μg/ml~1mg/ml的溶液。供试品溶液：取各待测供试品，配制成含目标胺类浓度为1μg/ml~1mg/ml的溶液。

结果计算：

以对照品溶液各胺类浓度的对数值与相应峰面积的对数值计算回归方程，以此计算待测物中胺类物质的含量。