[发明专利]一种雷公藤专用促生菌剂及其制备方法和应用

说明书

本发明属于微生物菌剂技术领域，特别涉及一种雷公藤专用促生菌剂及其制备方法和应用。所述菌剂由歧皱青霉NS‑12发酵而成，所述歧皱青霉NS‑12的分类命名为歧皱青霉（Penicillium steckii），该菌株已于2011年6月10日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.4928。该菌剂对雷公藤有明显的增益作用，可显著提高雷公藤的生物量及甲素含量，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于微生物菌剂技术领域，特别涉及一种雷公藤专用促生菌剂及其制备方法和应用。

背景技术

雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook.f．）是一种木质藤本植物，分布于我国南方福建、江西、浙江、湖北、湖南、广东、台湾等省，是珍贵的药用植物。现代研究发现雷公藤含有100种以上的成分，主要分为生物碱类、二萜类、三萜类、倍半萜类及糖，而雷公藤甲素是其最主要的活性成分之一，具有抗炎、抗癌、免疫调整、抗生育等功效，广泛用于治疗类风湿性关节炎、肺病、肾病、皮肤病、白血病等疾病，是雷公藤片、雷公多甙片等多种成药制剂的主要成分。长期以来雷公藤药材主要依靠野生及人工种植获取，由于有效成分含量极低，生长周期长，造成蕴藏量急剧下降，加之产地环境污染和为防病虫喷施农药等原因，使得原料药的供应在数量和质量上都不能满足临床应用的需要。

近年来，随着研究的不断深入，一些生长在药用植物体内的内生真菌引起了研究者的广泛关注。迄今为止，国内外学者已从红豆杉，银杏，青蒿等药用植物体内分离得到能够产生与宿主相同或相似的药用活性成分的内生真菌，从而为药用活性物质的非植物源获取提供了可能。但对这类特殊内生菌进行单独发酵生产时发现，大多数菌株所产生的药用活性成分含量极低，且受底物抑制效应明显，并不能满足大规模工业生产的条件。另有一些研究则发现，该类内生菌与宿主间的交互作用会对各自的活性成分生成产生影响，在一些内生菌与宿主植物所形成的菌植共生体中，其活性成分明显高于宿主植物本身的含量，具有良好的应用前景。然而，由于这类内生菌均筛选自植物体内，对外界环境条件相对敏感，如何长期保藏并维持一定的菌体活性是影响其推广应用的重要因素。本研究以一株前期筛选的具有生成雷公藤甲素能力的雷公藤内生真菌为对象，将其制备成微生物菌剂，并对该菌剂的菌体保存活性及实际施用效果进行了评价，相关成果对于促进雷公藤活性成分含量，提升其应用价值具有重意义。目前与此相关的研究则罕见报道。

发明内容

本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种雷公藤专用促生菌剂及其制备方法和应用。将该菌剂施用于雷公藤，可明显促进雷公藤植株的生长，提高雷公藤甲素在雷公藤体内的含量，具有良好的应用前景。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种雷公藤专用促生菌剂，所述菌剂由歧皱青霉NS-12发酵而成，所述歧皱青霉NS-12的分类命名为歧皱青霉（Penicillium steckii），该菌株已于2011年6月10日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.4928。

进一步的，上述的雷公藤专用促生菌剂为固态菌剂。

进一步的，上述的雷公藤专用促生固态菌剂的制备方法包括如下步骤：

1）菌种活化：将低温保存的歧皱青霉NS-12接种于PDA固体培养基上于28℃培养，待长出菌落后挑取单菌落转接到新的PDA固体培养基上，在28℃继续培养5d；

2）制备孢子悬浮液：将活化后的歧皱青霉NS-12接种到PDA平板上于28℃扩大培养，用无菌水洗脱孢子配制成浓度为1.0×10⁸个/mL的孢子悬浮液；

3）固体发酵：取100mL孢子悬浮液接种到1000g的固体发酵培养基中于28℃培养，每隔2~3天在无菌条件下进行一次搅拌，培养9 d后得到固体发酵菌剂；