[发明专利]用于肿瘤组织细胞外基质电化学发光成像的试剂盒、成像方法及其应用

说明书

本申请提供一种用于肿瘤组织细胞外基质电化学发光成像的试剂盒，其特征在于，包括：组织固定剂、SA@Ru标记物和共反应剂；其中，所述组织固定剂为多聚甲醛；所述SA@Ru标记物，由双(2,2′‑联吡啶)‑4′‑甲基‑4‑羧基吡啶‑钌‑N‑琥珀酰亚胺酯‑双(六氟磷酸盐)、链霉亲和素和PBS混合后得到；所述共反应剂为三丙胺。本申请建立了一种通过ECL近场成像对组织切片进行电化学可视化的试剂盒和成像与应用，提供了一项能获得高信噪比的近场信息、快速(几分钟)且易用的成像技术。这种技术有助于揭示切片表面的信息，特别是ECM这种在传统成像中被长期掩盖的组织支撑物。

技术领域

本申请涉及电化学发光领域，具体涉及一种用于肿瘤组织细胞外基质电化学发光成像的试剂盒、成像方法及其应用。

背景技术

电化学发光(electrochemiluminescence,ECL)是一种由电化学反应触发的光子发射。ECL结合了电化学激发和光学信号读出，因此它不需要任何光学激发，从而能提供极高的信号读取灵敏度。此外，由于反应中发光体的半衰期和共反应物的自由扩散距离均有限，发光物质的激发态往往在电极表面(小于4μm)产生，这种特性使最终的ECL光信号仅出现在距离电极表面几微米的范围内。这种新兴的成像技术已被应用于多种物体的近场成像，包括但不限于指纹、单微珠、单细胞、细胞膜蛋白和线粒体等。在最近的一些研究中，这项技术还展现了它能够像荧光成像技术那样实现超分辨率细胞成像的潜力。不过目前大多数ECL成像的目标集中在单个对象或简化的反应模型上，迄今为止ECL成像技术在复杂生物体系(例如组织切片)中的表现尚未被报道。因此实现组织切片的ECL可视化可能会帮助揭示其他经典的光学成像技术难以观察到的组织切片支撑面的信息。

几十年来，组织切片的成像和相应的组织学分析已经成为了肿瘤研究的重要参考。其中组织切片的体外分析已经发展成一个在临床实践中得到高度认可和依赖的领域。组织解剖和显微镜观察相结合的技术在临床诊断和基础医学研究中也发挥着不可或缺的作用。

目前苏木精和伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色是病理分析的主流方法，这种方法的依据是苏木精可以将嗜碱性结构染成蓝紫色，而伊红可以将嗜酸性结构染成品红色。但是由于染色有人工误差，组织质量也并不稳定，HE染色并不总是能提供稳定的对比度来区分各种组织特性、细胞结构或是化学物质的分布。

在生物学，细胞外间质或细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)是动物组织的一部分，不属于任何细胞。细胞外间质决定结缔组织的特性。ECM由BM和细胞间质组成，为肿瘤转移的重要组织屏障。肿瘤细胞通过其表面受体与ECM中的各种成分粘附后激活或分泌蛋白降解酶类来降解基质，从而形成局部溶解区，构成了肿瘤细胞转移运行通道。因此对于ECM的检测对于肿瘤的研究和与免疫组学结合更好的攻克和治疗也存在十分重要的作用。

近年来免疫荧光技术因其能对目标分子进行特异性标记和高分辨率成像而受到研究者们的青睐。但同时该技术也面临着一些问题，比如冗长的标记程序和光漂白以及自发荧光等荧光自身性质的限制。因此长久以来，人们一直期望在组织切片成像领域出现一种兼顾低背景、高灵敏和稳定成像的方法。

发明内容

技术问题

为解决上述技术问题，本申请旨在提供一种兼顾低背景、高灵敏和稳定成像的试剂盒、检测方法及应用。

技术方案

本申请提供一种用于肿瘤组织细胞外基质电化学发光成像的试剂盒，包括：

组织固定剂、SA@Ru标记物和共反应剂；其中，

所述组织固定剂为多聚甲醛；

所述SA@Ru标记物，由双(2,2′-联吡啶)-4′-甲基-4-羧基吡啶-钌-N-琥珀酰亚胺酯-双(六氟磷酸盐)、链霉亲和素和磷酸盐缓冲溶液混合后得到；

所述共反应剂为三丙胺(TPA)。