[发明专利]用于肿瘤组织细胞外基质电化学发光成像的试剂盒、成像方法及其应用

权利要求书

1.一种用于肿瘤组织细胞外基质电化学发光成像的试剂盒，其特征在于，包括：

组织固定剂、SA@Ru标记物和共反应剂；其中，

所述组织固定剂为多聚甲醛；

所述SA@Ru标记物，由双(2,2′-联吡啶)-4′-甲基-4-羧基吡啶-钌-N-琥珀酰亚胺酯-双(六氟磷酸盐)、链霉亲和素和磷酸盐缓冲溶液混合后得到；

所述共反应剂为三丙胺。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述双(2,2′-联吡啶)-4′-甲基-4-羧基吡啶-钌-N-琥珀酰亚胺酯-双(六氟磷酸盐)的浓度为0.5-5mg/mL，用量为100-500μL；

所述链霉亲和素浓度为0.5-5mg/mL，用量为100-500μL；

所述磷酸盐缓冲溶液的用量为600-1200μL。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述磷酸盐缓冲溶液由0.1M磷酸二氢钠一水合物和0.1M磷酸氢二钠七水合物混合得到。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述三丙胺浓度为0.1M，pH值为7.4。

5.一种使用权利要求1所述的用于肿瘤组织细胞外基质电化学发光成像的试剂盒的成像方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一：准备待检测的肿瘤组织冰冻切片，用磷酸盐缓冲溶液清洗，以洗脱冰冻切片表面的包埋剂OCT；

步骤二：用4％的多聚甲醛溶液，浸泡清洗后的肿瘤组织切片5-20分钟，以固定所述肿瘤组织切片；

步骤三：在室温下，用所述SA@Ru标记物孵育所述肿瘤组织切片10-40分钟，用磷酸盐缓冲溶液清洗后，转移至玻碳电极表面；

步骤四：用0.1M三丙胺溶液浸泡肿瘤组织切片，以提供电化学发光过程的共反应剂；

步骤五：通过Ag/AgCl/KCl 3M电极施加1.4-1.8V的恒电位激发肿瘤组织电化学发光，通过电子倍增电荷耦合器件记录得到的所述肿瘤组织细胞外基质电化学发光成像。

6.根据权利要求5所述的成像方法，其特征在于，所述SA@Ru标记物由溶解在DMSO的双(2,2′-联吡啶)-4′-甲基-4-羧基吡啶-钌-N-琥珀酰亚胺酯-双(六氟磷酸盐)、溶解在磷酸盐缓冲溶液里的链霉亲和素和磷酸盐缓冲溶液混合制得混合物；所述混合物在4℃涡旋混合2-6小时，在4℃透析4-10小时；得到SA@Ru标记物的溶液，所述SA@Ru标记物的溶液含有0.5-5mg/mL SA@Ru标记物。

7.根据权利要求5所述的成像方法，其特征在于，所述步骤五中的所述电化学发光成像通过具有三电极配置的聚四氟乙烯装置实施，其中，

玻碳电极作为工作电极，铂丝用作对电极，Ag/AgCl/KCl 3M电极用作参比电极，所述电化学发光由CHI 600E电化学分析仪激发，电化学发光图像通过落射荧光显微镜和电子倍增电荷耦合器件相机记录；扫描电子显微镜图像通过JEOL的JSM-7800F记录；循环伏安结果和ECL信号通过MPI-A ECL分析仪收集。

8.根据权利要求5所述的成像方法，其特征在于，还包括通透化处理，所述通透化处理为将所述肿瘤组织切片在用所述SA@Ru标记物孵育前使用0.5％的Triton X-100处理5-20分钟。

9.根据权利要求6所述的成像方法，其特征在于，步骤五中所述肿瘤组织细胞外基质电化学发光成像经过伪彩处理，在FIJI软件进行调整亮度/对比度、提取光强度分布曲线以及转换为3D版本的处理。

10.权利要求1所述的用于肿瘤组织细胞外基质电化学发光成像的试剂盒在检测肿瘤组织中ECM的应用。