[发明专利]一种用于抑制心肌肥大的生物源纳米硒的制备方法及药物

说明书

本发明属于纳米硒制备技术领域，公开了一种用于抑制心肌肥大的生物源纳米硒的制备方法及药物，选择牦牛源、马源的益生菌并纯化；将纯化后的益生菌接种至含亚硒酸钠的LB肉汤中，摇床培养；筛选亚硒酸钠还原率高、发酵液红色物质生成量多的菌株；将筛选的还原率高的菌株接种至LB肉汤中进行常规培养；将筛选的还原率较高的菌株在含亚硒酸钠的LB琼脂平板上划线培养，挑取红色单菌落，得到验证并筛选出最佳菌株蜡样芽孢杆菌A3；设置含亚硒酸钠的LB肉汤中硒含量浓度梯度以及培养时间梯度，选择得到最高耐受浓度以及最优培养时间，提取纳米硒球，进行表征及纯度测定。本发明的纳米硒有蛋白包被，粒径小，纯度高，稳定性更好。

技术领域

本发明属于纳米硒制备技术领域，尤其涉及一种用于抑制心肌肥大的生物源纳米硒的制备方法及药物。

背景技术

目前：硒(Se)是一种对生物系统有广泛影响的微量元素，它作为组成谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性中心的重要元素，在清除ROS及其衍生物的细胞抗氧化防御机制中发挥着重要作用。周驰利用生防菌枯草芽孢杆菌和亚硒酸钠溶液反应，制备了粒径范围50～250nm的纳米硒；车林利用Acillus cereus CC-1和亚硒酸钠溶液反应，制备了粒径范围100～250nm的纳米硒。相较于目前生产中广泛使用的有机硒(酵母硒、硒代蛋氨酸等)、无机硒(亚硒酸钠)而言，纳米硒具有更高活性、更高安全性、更强抗氧化性的特点。

然而现有的物理源或化学源纳米硒容易转化成黑色或褐色纳米硒，且制备过程对环境和生物不友好。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有的物理制备纳米硒的方法实验条件和成本较高，而化学制备纳米硒的方法制备过程易对环境造成污染不友好；同时物理方法制备的纳米硒容易转化成黑色或褐色纳米硒，从而降低其生物学效应不稳定。蒸发和激光烧蚀技术是仪器方法的例子，通常用于纳米粒子的合成。在化学技术中，使用添加剂、溶剂和稳定剂，如硼氢化物、乙胺、十二烷酸酯和许多其他化学物质。这些化学物质不环保，有害，对生物有毒。

解决以上问题及缺陷的意义为：一方面可以降低制作成本，另一方面可以增加其稳定性，并且更加环保。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种用于抑制心肌肥大的生物源纳米硒的制备方法及药物。

本发明是这样实现的，一种用于抑制心肌肥大的生物源纳米硒的制备方法，所述用于抑制心肌肥大的生物源纳米硒的制备方法包括：

采用牦牛源的益生菌利用微生物还原法进行纳米硒的制备。

进一步，所述用于抑制心肌肥大的生物源纳米硒的制备方法包括以下步骤：

步骤一，选择6株来自牦牛源、马源的益生菌，并对选择的6株益生菌进行纯化；将纯化后的益生菌按1％的接种量接种至含有3、6、12、18、24、30mmol/L 硒元素的LB肉汤培养基中常规培养；

步骤二，根据细菌发酵液的颜色，试管底部的红色沉淀多少，以及DAB法测量得到的亚硒酸钠还原率筛选出最佳菌株；

步骤三，将筛选的菌株在含3、6、12、18、24、30mmol/L亚硒酸钠的LB 琼脂平板上划线培养，挑取红色单菌落，重复3次液体发酵、琼脂平板划线，验证菌株；

步骤四，将选出的菌株按1％的比例接种至含有18、20、22.5、24mmol/L 亚硒酸钠的LB肉汤中进行浓度筛选。选出最适浓度后，将菌株按1％的比例接种至含有最适浓度亚硒酸钠的LB肉汤中培养12、24、48、72、96、120h进行时间筛选；

步骤五，将筛选出的菌株在LB肉汤中摇床培养至OD600为0.7时按1％的比例接种至含亚硒酸钠最佳浓度的LB肉汤中，在37℃，180r/min的条件下培养最适时间；