[发明专利]一种用于抑制心肌肥大的生物源纳米硒的制备方法及药物

权利要求书

1.一种用于抑制心肌肥大的生物源纳米硒的制备方法及药物，其特征在于，所述用于抑制心肌肥大的生物源纳米硒的菌株筛选及制备方法包括：从已有菌株中选出亚硒酸钠还原率最佳的一株，并筛选出其最佳培养浓度和时间，采用该筛选菌株和筛选条件利用微生物还原法进行纳米硒的制备。

2.如权利要求1所述用于抑制心肌肥大的生物源纳米硒的菌株筛选方法，其特征在于，所述用于抑制心肌肥大的生物源纳米硒的菌株筛选方法包括以下步骤：

步骤一，选择6株来自牦牛源、马源的益生菌，并对选择的6株益生菌进行纯化；将纯化后的益生菌按1％的接种量接种至含有3、6、12、18、24、30mmol/L硒元素的LB肉汤中常规培养；

步骤二，根据细菌发酵液的颜色，试管底部的红色沉淀多少，以及DAB法测量得到的亚硒酸钠还原率筛选出最佳菌株；

步骤三，将筛选的菌株在含3、6、12、18、24、30mmol/L亚硒酸钠的LB琼脂平板上划线培养，挑取红色单菌落，重复3次液体发酵、琼脂平板划线，验证菌株；

步骤四，将选出的菌株按1％的比例接种至含有18、20、22.5、24mmol/L亚硒酸钠的LB肉汤中进行浓度筛选。选出最适浓度后，将菌株按1％的比例接种至含有最适浓度亚硒酸钠的LB肉汤中培养12、24、48、72、96、120h进行时间筛选。

3.如权利要求1所述用于抑制心肌肥大的生物源纳米硒的制备方法，其特征在于，所述用于抑制心肌肥大的生物源纳米硒的制备方法包括以下步骤：

步骤一，将筛选出的菌株在LB肉汤中摇床培养至OD600为0.7时按1％的比例接种至含亚硒酸钠最佳浓度的LB肉汤中，在37℃，180r/min的条件下培养最适时间；

步骤二，将培养好的菌液在4℃，13000r/min离心10min，弃去上清；将沉淀用0.9％NaCl清洗三次，每次在12000r/min离心8min；清洗后将沉淀置于无菌研钵中，加入液氮研磨；研磨后用少量无菌水重悬，然后在冰浴、功率为100W的条件下超声处理10min，在4℃、12000r/min离心10min并收集沉淀物；用含1％SDS的1.5mol/L Tris-HCl(pH 8.3)离心洗涤沉淀物3次，最后用无菌水洗涤3次；

步骤三，用无菌水重悬沉淀物，按V重悬液∶V正辛醇＝2：1的比例加入正辛醇。充分混匀后，4℃，2000g离心5min，分离混合相，并在4℃下储存24h；

步骤四，经过24h后，将液体弃去，留沉淀；然后重复步骤三，直至混合相中间没有细菌碎片；然后弃去液体，沉淀用无菌水换管清洗5次，无菌水重悬，静置10分钟后吸取液体；

步骤五，纳米硒颗粒的制备：将在4℃静置24小时后的上下相弃去，留沉淀；然后分别用氯仿、75％乙醇清洗一次；然后用无菌水重悬沉淀，进行冷冻干燥48h以上，得到纳米硒颗粒；

步骤六，对纳米硒进行表征和Na₂S法检测纯度。

4.如权利要求2所述用于抑制心肌肥大的生物源纳米硒的菌株筛选方法，其特征在于，所述4株来自牦牛源、2株来自马源的益生菌包括：蜡样芽孢杆菌A1、蜡样芽孢杆菌A2、蜡样芽孢杆菌A3、枯草芽孢杆菌E1、枯草芽孢杆菌4.3、枯草芽孢杆菌9.3。

5.如权利要求2所述用于抑制心肌肥大的生物源纳米硒的菌株筛选方法，其特征在于，步骤一中，所述纯化包括：将已有的6株菌在LB肉汤培养基中常规培养，然后在LB琼脂平板上划线培养，挑取单菌落，重复液体发酵、琼脂平板划线，3次后提取细菌DNA进行测序鉴定。

6.如权利要求2所述用于抑制心肌肥大的生物源纳米硒的菌株筛选方法，其特征在于，步骤一中，所述摇床培养包括：37℃、180r/min的摇床中培养120h。