[发明专利]一种生产甲醇菌体蛋白联产纤维素酶的毕赤酵母及其应用

权利要求书

1.一种毕赤酵母菌株(Pichia pastoris)，其特征在于，所述菌株保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC NO. 24324。

2.一种产中性纤维素酶的毕赤酵母菌株，其特征在于，在如权利要求1所述的毕赤酵母菌株中导入特异腐质菌（Humicola insolens）的纤维素酶cel45a编码基因，所述纤维素酶cel45a的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。

3.一种产两种中性纤维素酶的毕赤酵母菌株，其特征在于，在如权利要求2所述的产中性纤维素酶的毕赤酵母菌株中进一步导入灰腐质霉(Humicola grisea) 的纤维素酶cel5a的编码基因，所述纤维素酶cel5a的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

4.如权利要求3所述的产两种中性纤维素酶的毕赤酵母菌株，其特征在于，所述导入采用基因编辑的方式实现，且将采用启动子AOX可操作与所述编码基因连接。

5.如权利要求3所述的产两种中性纤维素酶的毕赤酵母菌株，其特征在于，所述纤维素酶cel5a的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述纤维素酶cel45a的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。

6.一种生产纤维素酶制剂的方法，其包括利用如权利要求3-5任一项所述的产两种中性纤维素酶的毕赤酵母菌株生产纤维素酶的步骤。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，包括培养所述产两种中性纤维素酶的毕赤酵母菌株，收集所述产生的纤维素酶的步骤。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，发酵所述菌株的培养基中含有甘油，KH₂PO₄，NH₄H₂PO₄，MgSO₄·7H₂O；发酵过程中，甘油按照0.5-1.0rpm/ 30 min /次补料，维持DO≥20%；发酵至12-36小时，开始补料甲醇0.1 rpm/h，维持DO≥25%。

9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，培养温度30℃，pH 值4. 5~ 5. 0，空气流量4~8 m³/h。

10.如权利要求6至9任一项所述的方法所得到的纤维素酶制剂。

11.如权利要求10所述的纤维素酶制剂制备饲料添加剂中的应用。

12.如权利要求4-5任一项所述的产两种中性纤维素酶的毕赤酵母菌株在生产甲醇蛋白中的应用。

13.如权利要求12所述的应用，其特征在于，包括用甲醇诱导所述产两种中性纤维素酶的毕赤酵母菌株的步骤；将发酵液固液分离，收集甲醇菌体蛋白的步骤。