[发明专利]胶原基DPP-IV抑制肽的制备方法及胶原基DPP-IV抑制肽

说明书

本发明公开了胶原基DPP‑IV抑制肽的制备方法，包括如下步骤：步骤一，将冻干胶原蛋白用乙酸溶解后，用疏敏性离子液体处理，得疏敏性胶原蛋白；步骤二、将疏敏性胶原蛋白用乙酸复溶后，用间歇式超声波处理，得超声波修饰后的胶原蛋白；步骤三、将超声波修饰后的胶原蛋白用去离子水复溶后，用木瓜蛋白酶进行酶解处理，水解物离心、冷冻干燥，即得。本发明的制备方法易操作和成本低，且制备的胶原基DPP‑IV抑制肽具有分子量小、特异氨基酸含量丰富和活性强等优点。

技术领域

本发明涉及食品加工领域。更具体地说，本发明涉及一种胶原基DPP-IV抑制肽的制备方法及胶原基DPP-IV抑制肽。

背景技术

近年来，全球糖尿病患者持续增加，已成为一个重要的公共健康问题，据国际糖尿病联盟报告，2019年全球约有4.63亿人患糖尿病，预计到2045年，全球糖尿病患者将达到7亿。II-型糖尿病是糖尿病的主要类型，占糖尿病发病率的90％～95％，主要表现为胰岛素抵抗和(或)胰岛β细胞受损。目前，II型糖尿病的预防与治疗已引起全球范围内的广泛关注。DPP-IV抑制剂通过抑制DPP-IV的活性，防止胰高血糖素样肽-1裂解，间接调解胰岛素的分泌，缓解II型糖尿病患者的高血糖症状。虽然源自胶原蛋白的DPP-IV抑制剂被证明是抑制高血糖的潜在底物，并具有较好的抑制效果，但胶原蛋白稳定的三螺旋结构不易被蛋白酶水解，限制了胶原基DPP-IV抑制肽的开发。基于预处理提高DPP-IV抑制肽活性已有报道，但大部分研究集中于预处理原材料(皮和骨)，而对原料中胶原蛋白的影响不显著，此外，常见的预处理如酸和碱虽然价格低廉，但反应条件极端不易控制，且易产生影响水解物品质的产物。因此，高效、绿色的预处理方式修饰胶原蛋白结构以促进DPP-IV抑制肽的提取已成为急待解决的问题。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种胶原基DPP-IV抑制肽的制备方法及胶原基DPP-IV抑制肽，以解决上述问题。

为了实现根据本发明的目的和其它优点，提供了一种胶原基DPP-IV抑制肽的制备方法，包括如下步骤：

步骤一，将冻干胶原蛋白用乙酸溶解后，用疏敏性离子液体处理，得疏敏性胶原蛋白；

步骤二、将疏敏性胶原蛋白用乙酸复溶后，用间歇式超声波处理，得超声波修饰后的胶原蛋白；

步骤三、将超声波修饰后的胶原蛋白用去离子水复溶后，用木瓜蛋白酶进行酶解处理，水解物离心、冷冻干燥，即得。

优选的是，所述的胶原基DPP-IV抑制肽的制备方法，步骤一中，将冻干胶原蛋白用乙酸溶解，使胶原蛋白浓度为4～10mg/mL，在25±2℃下用磁力搅拌器搅拌10～30min后，将疏敏性离子液体按照疏敏性离子液体体积与冻干胶原蛋白质量比4:10加入胶原蛋白溶液中，再在25～37℃下采用梯度升温结合平板翻转振荡法搅拌1～3h，4500g离心10～30min，收集上清液，旋蒸，然后加入无水乙醇洗涤、离心，重复无水乙醇洗涤、离心操作，直至离心上清液中用Folin-phenol试剂检测不到疏敏性离子液体，最后将脱除疏敏性离子液体后的胶原蛋白样品进行冷冻干燥，得疏敏性胶原蛋白

优选的是，所述的胶原基DPP-IV抑制肽的制备方法，所述疏敏性离子液体为[EMIM][Ac]。

优选的是，所述的胶原基DPP-IV抑制肽的制备方法，所述梯度升温具体包括一次升温至25±1℃维持30±5min，二次升温至30±1℃维持30±5min，三次升温至37±1℃维持60±5min。

优选的是，所述的胶原基DPP-IV抑制肽的制备方法，步骤二中，将疏敏性胶原蛋白用乙酸复溶至浓度为4～10mg/mL，在25±2℃下用磁力搅拌器搅拌10～30min，再用超声波交替处理胶原蛋白溶液，超声波功率为400±100W，超声时间为20±10min，处理模式为2秒运行和2秒停止交替进行，处理后冷冻干燥，得超声波修饰后的胶原蛋白。