[发明专利]一种仿生纳米酶Hemin@BSA@ZIF-8及其应用

权利要求书

1.一种仿生纳米酶Hemin@BSA@ZIF-8的制备方法，包括如下步骤：

（1）BSA 溶于水中得到溶液A，氯化血红素溶于二甲亚砜中得到溶液B；将溶液A、溶液B和水混合后孵育反应；反应产物置于超纯水中透析，得到Hemin@BSA；

（2）将步骤（1）得到的Hemin@BSA加入到Zn(CH₃COO)₂·2H₂O溶液中，持续搅拌加入2-甲基咪唑溶液，搅拌后洗涤产物，离心、真空干燥得到Hemin@BSA@ZIF-8。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述溶液A的浓度为1~2mg/mL，溶液B的浓度为1 mg/mL；所述溶液A、溶液B和水的体积比为4：1：3。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述孵育反应的条件为25~37℃，反应30~40 min；所述透析的时间为36~48 h。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述Zn(CH₃COO)₂·2H₂O的浓度为40 mM，2-甲基咪唑溶液的浓度为160 mM；所述Hemin@BSA、Zn(CH₃COO)₂·2H₂O和2-甲基咪唑溶液的体积比为1~3：1：1。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述洗涤为用甲醇和SDS溶液洗涤2次以上，洗涤时间为10~15 min/次。

6.根据权利要求1~5任一项所述的制备方法制备的仿生纳米酶Hemin@BSA@ZIF-8。

7.权利要求6所述的仿生纳米酶Hemin@BSA@ZIF-8在BPA检测领域中的应用。

8.一种间接竞争酶联免疫分析法的构建方法，其特征在于，具体包括步骤：

（1）将Hemin@BSA@ZIF-8和PBS溶液在常温下磁力搅拌至完全溶解后加入BPA抗体，恒温搅拌得到BPA抗体标记物Hemin@BSA@ZIF-8@Ab；

（2）抗原包被：将BPA包被原用CBS包被缓冲液稀释至工作液浓度1:8000，包被于96孔板上，4℃过夜或37℃两小时孵育；孵育结束后，甩干酶标板，用含有0.05 % Tween-20的PBS溶液洗板3-5次，拍干备用；

（3）封闭：使用封闭缓冲液对步骤（2）中得到的酶标板进行封闭，恒温孵育1-2 h；孵育结束后甩干酶标板，洗板、拍干备用；

（4）BPA抗体标记物/标准品或样品竞争反应：使用抗体稀释液将步骤（1）得到的BPA抗体标记物稀释至工作浓度1:4；根据所设置标准曲线检测范围，稀释BPA标准储备液；然后将BPA抗体标记物溶液和标准品/样品溶液等体积加入酶标板中，空白对照组加BPA抗体标记物溶液和等体积PBS缓冲液，恒温孵育；孵育结束后甩干酶标板，洗板、拍干备用；

（5）显色反应：步骤（4）反应结束加入含有TMB和H₂O₂的底物缓冲液，继续恒温孵育；显色后，向每孔中加入H₂SO₄溶液，终止反应，使用多功能酶标仪读取450 nm波长下吸光度值；

（6）原始数据处理：对原始数据进行初步处理，以BPA标准品浓度为横坐标，以不同浓度BPA对应的吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，利用Origin 2021软件拟合标准曲线。

9.根据权利要求8所述的构建方法，其特征在于，步骤（1）中所述Hemin@BSA@ZIF-8、PBS溶液和BPA抗体的用量比例关系为：1.25 mg：1 mL：1~5μL；所述BPA抗体的浓度为1.9 μg/mL。

10.根据权利要求8所述的构建方法，其特征在于， 步骤（3）中所述封闭缓冲液中含有明胶的CBS溶液，明胶的质量分数为1%；步骤（4）中所述的抗体稀释液为含有0.01 % tween-20和0.1%明胶的PBS缓冲液；步骤（5）中所述底物缓冲液为含有TMB和H₂O₂的水溶液；所述底物缓冲液中TMB、H₂O₂、H₂O的体积比为2μL: 1μL:7μL。