[发明专利]一种表面展示新冠病毒RBD蛋白的类病毒样颗粒及其制备与应用

权利要求书

1.一种表面展示新冠病毒RBD蛋白的类病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，将新冠病毒SARS-CoV-2RBD抗原插入乙肝病毒核心抗原HBcAg的免疫显性区MIR，即乙肝病毒核心抗原HBcAg氨基酸编码序列的第79和80位之间或第79和81位之间，构建得到HBc-RBD融合蛋白，将HBc-RBD融合蛋白在原核细胞中自组装形成二十面体对称结构的病毒样颗粒VLPs，RBD抗原暴露在所述病毒样颗粒VLPs的外表面；RBD、HBc氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示，HBc-RBD氨基酸序列如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述融合蛋白中RBD的两端通过柔性linker(G4S)3与HBc连接。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：将HBc-RBD融合蛋白序列的5’和3’端设计添加NdeⅠ和XhoⅠ限制性内切酶位点，采用NdeⅠ和XhoⅠ限制性内切酶双酶切含HBc-RBD融合基因的载体和pET28a(+)原核表达载体后，酶切产物纯化后获得目的序列和线性化的pET28a(+)载体，用T4 DNA连接酶连接，将连接产物转化至大肠埃希菌，培养后提取得到重组质粒；将重组质粒转化至大肠埃希菌，经培养获得表达HBc-RBD融合蛋白的菌种；用自诱导培养基培养表达融合蛋白的菌种，经处理后获得纯化的HBc-RBD融合蛋白单体，纯化的HBc-RBD融合蛋白单体在组装缓冲液中自组装形成类病毒样颗粒。

4.根据权利要求1～3任一项所述的方法制备得到的类病毒样颗粒。

5.根据权利要求1～3任一项所述的方法制备得到的HBc-RBD融合蛋白。

6.一种重组质粒，其特征在于：包含权利要求5所述的HBc-RBD融合蛋白。

7.根据权利要求6所述的重组质粒，其特征在于：所述重组质粒以pET28a(+)载体为表达载体。

8.一种表达权利要求5所述的HBc-RBD融合蛋白的基因工程菌。

9.根据权利要求8所述的基因工程菌，其特征在于：所述基因工程菌为大肠埃希菌。

10.根据权利要求4所述的类病毒样颗粒、根据权利要求5所述的HBc-RBD融合蛋白、根据权利要求6～7任一项所述的重组质粒、根据权利要求8～9任一项所述的基因工程菌在制备新冠病毒SARS-CoV-2疫苗、检测试剂、预防或治疗药物中的应用。