[发明专利]一种牛脾转移因子的制备方法

权利要求书

1.一种牛脾转移因子的制备方法，其特征在于：其包括以下步骤：

1)选取健康牛的牛脾脏，去除牛脾脏表面的筋膜、脂肪组织，用注射用水洗净后，经绞肉机绞碎，将注射用水与绞碎后的牛脾脏混合，经胶体磨匀浆获得匀浆液；

2)匀浆液经细胞破碎后，进行离心分别获得一次上清液和一次沉淀物；将收获的上清液采用0.22-0.65μm滤膜进行切向流过滤，收集透过物；

3)将透过物用截留孔径分子量不同的滤膜逐级进行切向流过滤，收集透过物或截留物，获得所需的不同分子量范围的牛脾转移因子粗制品；

4)将步骤3)中至少一种分子量范围的牛脾转移因子粗制品混合，即为牛脾转移因子初制品；

5)对牛脾转移因子初制品，采用去除/灭活病毒方法进行除病毒后，调节pH至6.5-7.5，渗透压调节至280-320mosm/kg，采用0.1-0.22μm除菌过滤器除菌，即获得牛脾转移因子。

2.根据权利要求1所述的一种牛脾转移因子的制备方法，其特征在于：步骤2)中，将一次沉淀物与经盐酸调节pH值为4.0-6.5的注射用水混合，经胶体磨匀浆获得匀浆液，再次进行细胞破碎，离心获得二次上清液，合并一次上清液和二次上清液，将合并后的上清液采用0.22-0.65μm滤膜进行切向流过滤，收集透过物。

3.根据权利要求1所述的一种牛脾转移因子的制备方法，其特征在于：步骤3)具体如下：

3-1)小于10kDa牛脾转移因子粗制品的制备：将步骤2)中透过物采用10kDa滤膜进行切向流过滤，收集透过物，即为小于10kDa牛脾转移因子粗制品；

3-2)小于8kDa牛脾转移因子粗制品的制备：将步骤2)中透过物采用8kDa滤膜进行切向流过滤，收集透过物，即为小于8kDa牛脾转移因子粗制品；

3-3)小于5kDa牛脾转移因子粗制品的制备：将步骤2)中透过物采用5kDa滤膜进行切向流过滤，收集透过物，即为小于5kDa牛脾转移因子粗制品；

3-4)8至10kDa牛脾转移因子粗制品的制备：将步骤3-1)中小于10kDa牛脾转移因子粗制品采用8KD滤膜进行切向流过滤，收集截留物，即为8至10kDa牛脾转移因子粗制品；

3-5)5至10kDa牛脾转移因子粗制品的制备：将步骤3-1)中小于10kDa牛脾转移因子粗制品采用5KD滤膜进行切向流过滤，收集截留物，即为5至10kDa牛脾转移因子粗制品；

3-6)3至10kDa牛脾转移因子粗制品的制备：将步骤3-1)中小于10kDa牛脾转移因子粗制品采用3KD滤膜进行切向流过滤，收集截留物，即为3至10kDa牛脾转移因子粗制品；

3-7)1至10kDa牛脾转移因子粗制品的制备：将步骤3-1)中小于10kDa牛脾转移因子粗制品，采用1KD滤膜进行切向流过滤，收集截留物，即为1至10kDa牛脾转移因子粗制品；

3-8)5至8kDa牛脾转移因子粗制品的制备：将步骤3-2)中小于8kDa牛脾转移因子粗制品采用5KD滤膜进行切向流过滤，收集截留物，即为5至8kDa牛脾转移因子粗制品；

或者，将步骤3-5)中5至10kDa牛脾转移因子粗制品采用8KD滤膜进行切向流过滤，收集透过物，即为5至8kDa牛脾转移因子粗制品；

3-9)3至8kDa牛脾转移因子粗制品的制备：将步骤3-2)中小于8kDa牛脾转移因子粗制品采用3KD滤膜进行切向流过滤，收集截留物，即为3至8kDa牛脾转移因子粗制品；

或者，将步骤3-6)中3至10kDa牛脾转移因子粗制品，采用8KD滤膜进行切向流过滤，收集透过物，即为3至8kDa牛脾转移因子粗制品；

3-10)1至8kDa牛脾转移因子粗制品的制备：将步骤3-2)中小于8kDa牛脾转移因子粗制品，采用1KD滤膜进行切向流过滤，收集截留物，即为1至8kDa牛脾转移因子粗制品；

或者，将步骤3-7)中1至10kDa牛脾转移因子粗制品，采用8KD滤膜进行切向流过滤，收集透过物，即为1至8kDa牛脾转移因子粗制品；

3-11)3至5kDa牛脾转移因子粗制品的制备：将步骤3-3)中小于5kDa牛脾转移因子粗制品，采用3KD滤膜进行切向流过滤，收集截留物，即为3至5kDa牛脾转移因子粗制品；

或者，将步骤3-6)中3至10kDa牛脾转移因子粗制品或步骤3-9)中3至8kDa牛脾转移因子粗制品，采用5KD滤膜进行切向流过滤，收集透过物，即为3至5kDa牛脾转移因子粗制品；

3-12)1至5kDa牛脾转移因子粗制品的制备：将步骤3-3)中小于5kDa牛脾转移因子粗制品，采用1KD滤膜进行切向流过滤，收集截留物，即为1至5kDa牛脾转移因子粗制品；

或者，将步骤3-7)中1至10kDa牛脾转移因子粗制品或步骤3-10)中1至8kDa牛脾转移因子粗制品，采用5KD滤膜进行切向流过滤，收集透过物，即为1至5kDa牛脾转移因子粗制品；

3-13)小于3kDa牛脾转移因子粗制品的制备：将步骤3-1)中小于10kDa牛脾转移因子粗制品、步骤3-2)中小于8kDa牛脾转移因子粗制品、或步骤3-3)中小于5kDa牛脾转移因子粗制品，采用3KD滤膜进行切向流过滤，收集透过物，即为小于3kDa牛脾转移因子粗制品；

或者，将步骤2)中透过物采用30-500kDa滤膜进行切向流过滤，收集透过物并采用3KD滤膜进行切向流过滤，收集透过物，即为小于3kDa牛脾转移因子粗制品；

3-14)1至3kDa牛脾转移因子粗制品的制备：将步骤3-13)中小于3kDa牛脾转移因子粗制品，采用1KD滤膜进行切向流过滤，收集截留物，即为1至3kDa牛脾转移因子粗制品；

或者，将步骤3-7)中1至10kDa牛脾转移因子粗制品、步骤3-10)中1至8kDa牛脾转移因子粗制品或步骤3-12)中1至5kDa牛脾转移因子粗制品，采用3KD滤膜进行切向流过滤，收集透过物，即为1至3kDa牛脾转移因子粗制品；

3-15)小于1kDa牛脾转移因子粗制品的制备：将步骤3-1)中小于10kDa牛脾转移因子粗制品、步骤3-2)中小于8kDa牛脾转移因子粗制品、步骤3-3)中小于5kDa牛脾转移因子粗制品或步骤3-13)中小于3kDa牛脾转移因子粗制品，采用1KD滤膜进行切向流过滤，收集透过物，即为小于1kDa牛脾转移因子粗制品；

或者，将步骤2)中透过物采用30-300kDa滤膜进行切向流过滤，收集透过物并采用1KD滤膜进行切向流过滤，收集透过物，即为小于1kDa牛脾转移因子粗制品。