[发明专利]一种牛脾转移因子的制备方法在审
申请号: | 202210593657.8 | 申请日: | 2022-05-27 |
公开(公告)号: | CN115054615A | 公开(公告)日: | 2022-09-16 |
发明(设计)人: | 徐磊;林祚贵;胡美华;余勋信;陈上永;游开铿;吴清伙;刘毅发;谢杼倢;王宗冬;钟云钦;廖惠珍;傅秋玲;黄瑜;张渊魁 | 申请(专利权)人: | 福建农业职业技术学院;派生特(福州)生物科技有限公司;福建兴邦生物科技有限公司;福州众为生物科技有限公司;福建福誉农业科技开发有限公司 |
主分类号: | A61K35/26 | 分类号: | A61K35/26;A61K38/19;A61P37/04 |
代理公司: | 福州君诚知识产权代理有限公司 35211 | 代理人: | 戴雨君 |
地址: | 350111 福建*** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 种牛 转移因子 制备 方法 | ||
1.一种牛脾转移因子的制备方法,其特征在于:其包括以下步骤:
1)选取健康牛的牛脾脏,去除牛脾脏表面的筋膜、脂肪组织,用注射用水洗净后,经绞肉机绞碎,将注射用水与绞碎后的牛脾脏混合,经胶体磨匀浆获得匀浆液;
2)匀浆液经细胞破碎后,进行离心分别获得一次上清液和一次沉淀物;将收获的上清液采用0.22-0.65μm滤膜进行切向流过滤,收集透过物;
3)将透过物用截留孔径分子量不同的滤膜逐级进行切向流过滤,收集透过物或截留物,获得所需的不同分子量范围的牛脾转移因子粗制品;
4)将步骤3)中至少一种分子量范围的牛脾转移因子粗制品混合,即为牛脾转移因子初制品;
5)对牛脾转移因子初制品,采用去除/灭活病毒方法进行除病毒后,调节pH至6.5-7.5,渗透压调节至280-320mosm/kg,采用0.1-0.22μm除菌过滤器除菌,即获得牛脾转移因子。
2.根据权利要求1所述的一种牛脾转移因子的制备方法,其特征在于:步骤2)中,将一次沉淀物与经盐酸调节pH值为4.0-6.5的注射用水混合,经胶体磨匀浆获得匀浆液,再次进行细胞破碎,离心获得二次上清液,合并一次上清液和二次上清液,将合并后的上清液采用0.22-0.65μm滤膜进行切向流过滤,收集透过物。
3.根据权利要求1所述的一种牛脾转移因子的制备方法,其特征在于:步骤3)具体如下:
3-1)小于10kDa牛脾转移因子粗制品的制备:将步骤2)中透过物采用10kDa滤膜进行切向流过滤,收集透过物,即为小于10kDa牛脾转移因子粗制品;
3-2)小于8kDa牛脾转移因子粗制品的制备:将步骤2)中透过物采用8kDa滤膜进行切向流过滤,收集透过物,即为小于8kDa牛脾转移因子粗制品;
3-3)小于5kDa牛脾转移因子粗制品的制备:将步骤2)中透过物采用5kDa滤膜进行切向流过滤,收集透过物,即为小于5kDa牛脾转移因子粗制品;
3-4)8至10kDa牛脾转移因子粗制品的制备:将步骤3-1)中小于10kDa牛脾转移因子粗制品采用8KD滤膜进行切向流过滤,收集截留物,即为8至10kDa牛脾转移因子粗制品;
3-5)5至10kDa牛脾转移因子粗制品的制备:将步骤3-1)中小于10kDa牛脾转移因子粗制品采用5KD滤膜进行切向流过滤,收集截留物,即为5至10kDa牛脾转移因子粗制品;
3-6)3至10kDa牛脾转移因子粗制品的制备:将步骤3-1)中小于10kDa牛脾转移因子粗制品采用3KD滤膜进行切向流过滤,收集截留物,即为3至10kDa牛脾转移因子粗制品;
3-7)1至10kDa牛脾转移因子粗制品的制备:将步骤3-1)中小于10kDa牛脾转移因子粗制品,采用1KD滤膜进行切向流过滤,收集截留物,即为1至10kDa牛脾转移因子粗制品;
3-8)5至8kDa牛脾转移因子粗制品的制备:将步骤3-2)中小于8kDa牛脾转移因子粗制品采用5KD滤膜进行切向流过滤,收集截留物,即为5至8kDa牛脾转移因子粗制品;
或者,将步骤3-5)中5至10kDa牛脾转移因子粗制品采用8KD滤膜进行切向流过滤,收集透过物,即为5至8kDa牛脾转移因子粗制品;
3-9)3至8kDa牛脾转移因子粗制品的制备:将步骤3-2)中小于8kDa牛脾转移因子粗制品采用3KD滤膜进行切向流过滤,收集截留物,即为3至8kDa牛脾转移因子粗制品;
或者,将步骤3-6)中3至10kDa牛脾转移因子粗制品,采用8KD滤膜进行切向流过滤,收集透过物,即为3至8kDa牛脾转移因子粗制品;
3-10)1至8kDa牛脾转移因子粗制品的制备:将步骤3-2)中小于8kDa牛脾转移因子粗制品,采用1KD滤膜进行切向流过滤,收集截留物,即为1至8kDa牛脾转移因子粗制品;
或者,将步骤3-7)中1至10kDa牛脾转移因子粗制品,采用8KD滤膜进行切向流过滤,收集透过物,即为1至8kDa牛脾转移因子粗制品;
3-11)3至5kDa牛脾转移因子粗制品的制备:将步骤3-3)中小于5kDa牛脾转移因子粗制品,采用3KD滤膜进行切向流过滤,收集截留物,即为3至5kDa牛脾转移因子粗制品;
或者,将步骤3-6)中3至10kDa牛脾转移因子粗制品或步骤3-9)中3至8kDa牛脾转移因子粗制品,采用5KD滤膜进行切向流过滤,收集透过物,即为3至5kDa牛脾转移因子粗制品;
3-12)1至5kDa牛脾转移因子粗制品的制备:将步骤3-3)中小于5kDa牛脾转移因子粗制品,采用1KD滤膜进行切向流过滤,收集截留物,即为1至5kDa牛脾转移因子粗制品;
或者,将步骤3-7)中1至10kDa牛脾转移因子粗制品或步骤3-10)中1至8kDa牛脾转移因子粗制品,采用5KD滤膜进行切向流过滤,收集透过物,即为1至5kDa牛脾转移因子粗制品;
3-13)小于3kDa牛脾转移因子粗制品的制备:将步骤3-1)中小于10kDa牛脾转移因子粗制品、步骤3-2)中小于8kDa牛脾转移因子粗制品、或步骤3-3)中小于5kDa牛脾转移因子粗制品,采用3KD滤膜进行切向流过滤,收集透过物,即为小于3kDa牛脾转移因子粗制品;
或者,将步骤2)中透过物采用30-500kDa滤膜进行切向流过滤,收集透过物并采用3KD滤膜进行切向流过滤,收集透过物,即为小于3kDa牛脾转移因子粗制品;
3-14)1至3kDa牛脾转移因子粗制品的制备:将步骤3-13)中小于3kDa牛脾转移因子粗制品,采用1KD滤膜进行切向流过滤,收集截留物,即为1至3kDa牛脾转移因子粗制品;
或者,将步骤3-7)中1至10kDa牛脾转移因子粗制品、步骤3-10)中1至8kDa牛脾转移因子粗制品或步骤3-12)中1至5kDa牛脾转移因子粗制品,采用3KD滤膜进行切向流过滤,收集透过物,即为1至3kDa牛脾转移因子粗制品;
3-15)小于1kDa牛脾转移因子粗制品的制备:将步骤3-1)中小于10kDa牛脾转移因子粗制品、步骤3-2)中小于8kDa牛脾转移因子粗制品、步骤3-3)中小于5kDa牛脾转移因子粗制品或步骤3-13)中小于3kDa牛脾转移因子粗制品,采用1KD滤膜进行切向流过滤,收集透过物,即为小于1kDa牛脾转移因子粗制品;
或者,将步骤2)中透过物采用30-300kDa滤膜进行切向流过滤,收集透过物并采用1KD滤膜进行切向流过滤,收集透过物,即为小于1kDa牛脾转移因子粗制品。
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