[发明专利]三维均相填充型磁性-贵金属复合纳米酶、其新冠抗原免疫层析试纸及应用

权利要求书

1.用于酶放大可视化检测新冠抗原的磁性-贵金属复合纳米酶，其特征在于它是以树枝状介孔二氧化硅dSiO₂为载体，该载体上修饰接枝聚乙烯亚胺PEI作为中间介质层，利用dSiO₂载体上PEI的氨基的配位作用依次负载磁性纳米颗粒Fe₃O₄和纳米颗粒Pt，最后经羧基化修饰得到的树状介孔dSiO₂/Fe₃O₄/Pt-PEI复合结构。

2.如权利要求1所述的用于酶放大可视化检测新冠抗原的磁性-贵金属复合纳米酶，其特征在于所述树枝状介孔二氧化硅dSiO₂的制备方法为：以十六烷基三甲基溴化铵CTAB为模板，水杨酸钠为结构导向剂，三乙醇胺作为催化剂，以水为溶剂，于70-90℃下搅拌反应0.5～2h后，加入硅源硅酸四乙酯，继续搅拌反应2～5h，即制得所述超大孔径的树枝状介孔二氧化硅模板；其中，所述十六烷基三甲基溴化铵、水杨酸钠和三乙醇胺的质量比为1:0.4～0.6:0.1～0.3，优选为1:0.55～0.6:0.16～0.2；所述十六烷基三甲基溴化铵质量与硅酸四乙酯体积之比为(0.08～0.1)g:1mL。

3.如权利要求1所述的用于酶放大可视化检测新冠抗原的磁性-贵金属复合纳米酶，其特征在于该磁性-贵金属复合纳米酶的具体制备方法为，包括以下步骤：

1)磁性四氧化三铁负载的树枝状介孔二氧化硅dSi/IO-PEI复合微球的制备

将树枝状介孔二氧化硅dSiO₂分散至无水乙醇中，加入铁盐和聚乙烯亚胺PEI，再加入三甘醇超声均匀；在氩气气氛下，于200～220℃猛烈搅拌反应1.5～2.5h，再持续加热到280～290℃，搅拌反应0.5～1.5h，冷却到室温后磁分离得到产物，用乙醇洗涤数次，获得磁性四氧化三铁负载的树枝状介孔二氧化硅复合微球，将其标记为dSi/IO-PEI；

2)树枝状介孔二氧化硅微球/四氧化三铁/铂纳米微球dSi/IO/Pt-PEI的制备

将步骤1)获得的dSi/IO-PEI微球加入至超纯水中，混合均匀后，加入铂盐和聚乙烯吡咯烷酮PVP超声均匀后在冰水浴下搅拌5～20min，使铂盐负载于dSi/IO-PEI微球上；然后加入硼氢化钠溶液搅拌反应1～3h，使dSi/IO-PEI微球上负载的铂盐还原成铂纳米颗粒，反应完成后磁分离得到产物，将产物用超纯水洗涤数次，即得到树枝状介孔二氧化硅微球/四氧化三铁/铂纳米微球，将其标记为dSi/IO/Pt-PEI；

3)羧基化dSi/IO/Pt-PEI微球的制备

将步骤2)所得dSi/IO/Pt-PEI微球分散于无水DMF中，然后加入丁二酸酐后在室温下搅拌反应16～20h，在反应完成后通过磁分离获得产物，将产物用超纯水洗涤数次，即得到经羧基化修饰得到的树状介孔dSiO₂/Fe₃O₄/Pt-PEI复合微球，将其标记为dSi/IO/Pt-PEI-COOH。

4.如权利要求3所述的用于酶放大可视化检测新冠抗原的磁性-贵金属复合纳米酶，其特征在于步骤1)中，树枝状介孔二氧化硅dSiO₂、铁盐和聚乙烯亚胺PEI的投料质量比为60～70：350～380：35～45，铁盐为三乙酰丙酮铁。

5.如权利要求3所述的用于酶放大可视化检测新冠抗原的磁性-贵金属复合纳米酶，其特征在于步骤1)中dSiO₂与步骤2)中铂盐和聚乙烯吡咯烷酮PVP的投料质量比为60～70：20～22：45～55，铂盐为四氯铂酸钾；铂盐与硼氢化钠的投料质量比为1.4～1.5:1。

6.如权利要求3所述的用于酶放大可视化检测新冠抗原的磁性-贵金属复合纳米酶，其特征在于步骤1)中dSiO₂与步骤3)中丁二酸酐的投料质量比为40～42：50。