[发明专利]一种高效稳定表达激活型抗体的CAR-T细胞及其用途

权利要求书

1.一种转基因T细胞，其特征在于，所述T细胞基因组中稳定整合了含编码嵌合抗原受体，及针对CD28的激活型抗体的核酸序列的表达框，且表达框的两端包含转座子的反向末端重复序列；其中，所述嵌合抗原受体是针对EGFR家族的嵌合抗原受体，所述针对CD28的激活型抗体为膜锚定型抗体。

2.如权利要求1所述的转基因T细胞，其特征在于，所述转座子选自：piggybac、sleeping beauty、frog prince、Tn5和Ty。

3.如权利要求2所述的转基因T细胞，其特征在于，所述转座子为piggybac。

4.如权利要求1所述的转基因T细胞，其特征在于，所述激活型抗体选自：抗体全长序列或其功能性片段。

5.如权利要求4所述的转基因T细胞，其特征在于，所述激活型抗体选自：Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv和scFv-Fc。

6.如权利要求1所述的转基因T细胞，其特征在于，激活型抗体为抗CD28抗体的scFv。

7.如权利要求1所述的转基因T细胞，其特征在于，所述转基因T细胞还包含刹车分子。

8.如权利要求7所述的转基因T细胞，其特征在于，该刹车分子为可被已上市抗体药物识别的膜抗原。

9.如权利要求8所述的转基因T细胞，其特征在于，所述膜抗原选自CD11a、CD15、CD19、CD20、CD25、CD44、CD47、CD52、EGFR、ERBB2、ERBB3、ERBB4、VEGFR1、VEGFR2、EpCAM、MSLN、GPIIb/IIIa、α4整合素和α4β7整合素。

10.如权利要求8所述的转基因T细胞，其特征在于，所述膜抗原为CD20。

11.如权利要求1-10中任一项所述的转基因T细胞，其特征在于，所述转基因T细胞转入了以下核酸构建物C：

核酸构建物C：含有转座子5’反向末端重复序列，编码任选的刹车分子、嵌合抗原受体和针对CD28的激活型抗体的核酸序列及控制该核酸序列表达的启动子，polyA加尾信号序列，转座子3’反向末端重复序列，转座酶编码序列和控制转座酶编码序列表达的启动子。

12.如权利要求11所述的转基因T细胞，其特征在于，采用病毒转导、显微注射、粒子轰击、基因枪转化和电转中的一种或多种方法将所述核酸构建物C转入所述细胞中。

13.如权利要求12所述的转基因T细胞，其特征在于，采用电转将所述核酸构建物C转入所述细胞中。

14.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有权利要求1-13中任一项所述的转基因T细胞和药学上可接受的辅料。

15.权利要求1-13中任一项所述的转基因T细胞或权利要求14所述的药物组合物的用途，其特征在于，所述用途选自：

制备用于抑制肿瘤细胞生长的药物、制备用于抑制病毒生长的药物、制备用于治疗肿瘤的药物、制备用于治疗病毒感染性疾病的药物、制备用于治疗细菌感染性疾病的药物和制备用于治疗自身免疫疾病的药物；

其中，所述肿瘤选自：肝癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、鼻咽癌、淋巴瘤、卵巢癌、膀胱癌、前列腺癌和头颈部肿瘤。