[发明专利]一种银杏叶提取物洗脱过程中总萜内酯含量的快速测定方法

权利要求书

1.一种银杏叶提取物洗脱过程中总萜内酯含量的快速测定模型的建立方法，包括以下步骤：

1)将银杏叶提取物样品过层析柱洗脱，获得洗脱液；

2)将步骤1)获得的洗脱液采用近红外光谱法进行测定，获得洗脱液中总萜内酯的吸光度数据，将吸光度数据分别采用不同光谱预处理方法进行光谱预处理，获得各种光谱预处理后吸光度数据；

3)将步骤1)获得的洗脱液采用液相色谱质谱联用法进行测定，获得洗脱液中总萜内酯的含量数据；

4)将步骤3)获得的洗脱液中总萜内酯的含量数据作为实测样本按Kennard-Stone算法原理分别归类为校正集和验证集；

5)将步骤4)获得的校正集中实测样本数据，与对应的各种光谱预处理后吸光度数据拟合出各种光谱预处理后样本-吸光度工作曲线，作为预测模型，再将校正集和验证集中实测样本对应的各种光谱预处理后吸光度数据代入预测模型中，获得校正集和验证集中预测样本数据；

6)将校正集中实测样本数据和预测样本数据分别计算R、RMSEC、RPD，将验证集中实测样本数据和预测样本数据分别计算RMSEP、RSEP，以相关系数R、RMSEC为指标选择波段，以RPD、RMSEP、RSEP为指标选择光谱预处理方法；

7)采用步骤6)选择的光谱预处理方法对步骤6)选择的波段范围内的洗脱液中总萜内酯的吸光度数据进行光谱预处理后，根据光谱预处理后总萜内酯的吸光度数据与相应总萜内酯的含量数据拟合出总萜内酯的含量-吸光度工作曲线，建立快速测定模型。

2.根据权利要求1所述的一种银杏叶提取物洗脱过程中总萜内酯含量的快速测定模型的建立方法，其特征在于，步骤2)中，包括以下条件中任一项或多项：

A1)所述近红外光谱法的测定条件为：空白背景为空气；分辨率为5-10cm^-1；图谱扫描次数为30-35次；样品扫描次数为2-4次；扫描时间25-35s；扫描光谱范围为4000～12000cm^-1；

A2)所述光谱预处理方法选自导数法、减去一条直线法、矢量归一化法、多元散射校正法中的一种或多种组合。

3.根据权利要求1所述的一种银杏叶提取物洗脱过程中总萜内酯含量的快速测定模型的建立方法，其特征在于，步骤3)中，所述液相色谱质谱联用法进行测定，还包括以下步骤：

a)对照品溶液的制备：将总萜内酯的对照品加入二甲基亚砜溶解并定容，配成对照品溶液，所述总萜内酯包括银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯；

b)测定：采用液相色谱质谱联用法分别测定供试品溶液和步骤a)中的对照品溶液，通过保留时间指认出共有特征峰定性，再根据共有特征峰的色谱峰面积通过外标法定量，确定供试品溶液中待测成分的含量。

4.根据权利要求3所述的一种银杏叶提取物洗脱过程中总萜内酯含量的快速测定模型的建立方法，其特征在于，所述液相色谱质谱联用法中，

所述液相色谱的测定条件为：色谱柱：C₁₈色谱柱；检测器：质谱；检测波长：无；柱温：40-50℃；流速：0.1-0.3ml/min；进样量：0.5-2μl；流动相：0.05-0.2％甲酸水溶液-甲醇，其中，A相为：0.05-0.2％甲酸水溶液，B相为：甲醇；分析时间为60min；梯度洗脱；

所述质谱的测定条件为：电离方式：负离子检测模式，Sensitivity模式，分辨率为25000-35000；毛细管电压-3.0～-2.0kV；样品锥孔电压35-45V；源偏移电压75-85V；离子源温度为115-125℃；脱溶剂温度440-460℃；脱溶剂气流速750-850L/h；锥孔气45-55L/h；雾化气压力5.5-6.5bar；质量数校正范围m/z 50-1000；校正溶液为0.45-0.55mM甲酸钠溶液，流速15-25μL/min；实时校正lock spray为0.95-1.05ng/μL的亮氨酸脑啡肽溶液，m/z554.2615；数据采集方法为fullscan；无能量范围；扫描时间为0.1-0.3s。