[发明专利]一种黄酮合酶I/黄烷酮-3-羟化酶及在黄酮类化合物合成领域的应用有效
| 申请号： | 202210565180.2 | 申请日： | 2022-05-23 |
| 公开（公告）号： | CN114854703B | 公开（公告）日： | 2023-08-22 |
| 发明（设计）人： | 程爱霞;傅杰;谭慧;汪飘逸;娄红祥 | 申请（专利权）人： | 山东大学 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12N15/84;A01H5/10;A01H5/00;A01H6/20;C12P17/06;C12R1/19 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 李筝 |
| 地址： | 250061 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 黄酮 黄烷 羟化酶 酮类 化合物 合成 领域 应用 | ||
1.一种黄酮合酶I/黄烷酮-3-羟化酶，其特征在于，所述酶的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。
2.编码权利要求1所述黄酮合酶I/黄烷酮-3-羟化酶的核酸物质。
3.如权利要求2所述的核酸物质，其特征在于，所述编码核酸为DNA，包括基因组DNA或人工合成的DNA；所述DNA为单链或双链的，为编码链。
4.如权利要求3所述的核酸物质，其特征在于，SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的黄酮合酶I/黄烷酮-3-羟化酶，其编码核酸序列如SEQ ID NO.2所示。
5.包含权利要求2所述核酸物质的表达载体。
6.如权利要求5所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为pET系列载体。
7.包含权利要求2-4任一项所述核酸物质或权利要求5或6所述表达载体的宿主细胞。
8.如权利要求7所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为微生物细胞。
9.如权利要求8所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为大肠杆菌。
10.一种表达黄酮合酶I/黄烷酮-3-羟化酶的工程菌，其特征在于，所述工程菌与野生型相比，被修饰为具有权利要求1所述黄酮合酶I/黄烷酮-3-羟化酶表达。
11.如权利要求10所述表达黄酮合酶I/黄烷酮-3-羟化酶的工程菌，其特征在于，所述工程菌的出发菌株选自大肠杆菌。
12.如权利要求11所述的工程菌，其特征在于，所述大肠杆菌通过转化重组表达质粒实现所述黄酮合酶I/黄烷酮-3-羟化酶的表达。
13.权利要求1所述黄酮合酶I/黄烷酮-3-羟化酶、权利要求2-4任一项所述编码核酸、权利要求5或6所述表达载体、权利要求7-9任一项所述宿主细胞、权利要求10-12任一项所述表达黄酮合酶I/黄烷酮-3-羟化酶的工程菌在植物黄酮合成领域的应用。
14.如权利要求13所述黄酮合酶I/黄烷酮-3-羟化酶、编码核酸、表达载体、宿主细胞、表达黄酮合酶I/黄烷酮-3-羟化酶的工程菌在植物黄酮合成领域的应用，其特征在于，所述植物黄酮包括黄酮及黄酮醇，所述在植物黄酮合成领域的应用包括以下任意一种：
(1)提高植物中黄酮类化合物的含量从而获得具有良好抗性的植株；
(2)获取高黄酮类化合物含量的植株作为提取原料。
15.如权利要求14所述的应用，其特征在于，所述应用为采用权利要求5或6所述表达载体的农杆菌转化到拟南芥中从而获得阳性转染植株。
16.一种黄酮类化合物的生物合成方法，其特征在于，所述合成方法以黄烷酮类化合物为底物，加入权利要求1所述黄酮合酶I/黄烷酮-3-羟化酶或权利要求10-12任一项所述工程菌合成相应的黄酮类化合物。
17.如权利要求16所述黄酮类化合物的生物合成方法，其特征在于，所述底物为包括圣草酚、高圣草素、橙皮素、乔松素、甘草素中的任意一种。
18.如权利要求17所述黄酮类化合物的生物合成方法，其特征在于，所述黄酮合酶I/黄烷酮-3-羟化酶的体外合成温度为0～50℃。
19.如权利要求18所述黄酮类化合物的生物合成方法，其特征在于，体外合成温度为38～45℃。
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