[发明专利]检测慢性间质性肾炎的重组抗原的制备方法

权利要求书

1.编码β2-微球蛋白的核酸，其具有如SEQ ID NO.1所示的序列。

2.包括权利要求1所述的核酸的质粒载体。

3.表达β2-微球蛋白的酵母，其特征在于，其表达如SEQ ID NO.1所示的核酸。

4.β2-微球蛋白的制备方法，其特征在于，所述方法包括培养权利要求3所述的酵母，诱导蛋白表达。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法包括起始生长阶段、富集培养阶段和诱导培养阶段：

所述起始生长阶段的培养基包括MD培养基、YNB培养基和BMGY培养基培养；

所述富集培养阶段和所述诱导阶段的培养基包括BSM2培养基、PTM1、Biotin和YNB培养基。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，

所述起始生长阶段依MD固体培养基划线培养权利要求3所述的酵母，以YNB培养基进行一级种子制备，以BMGY培养基进行二级种子制备；

所述富集培养阶段以补料III控制pH值，然后流加补料I，所述补料I包括甘油和PTM1，所述补料III为25vol％的氨水；

所述诱导培养阶段加入补料V后，流加补料II、补料Ⅳ和补料VI，所述补料II包括100％甲醇和PTM1；所述补料Ⅳ为15wt％的尿素溶液；所述补料V为200g/L蛋白胨溶液；所述补料VI为150g/L的硫酸镁溶液。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，

所述富集培养阶段，控制pH至为6.0±0.2，所述流加补料I维持发酵液溶氧为30％±5％；

所述诱导培养阶段，补料V的加入量为发酵体积的3.5％，所述流加补料II维持发酵液溶氧为30％±5％，所述补料IV的流速为2ml/h/L，所述补料VI的流速为2.4ml/h/L，诱导48h后，再次加入发酵体积的3.5％的补料V。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，

所述起始生长阶段：温度为26℃～32℃；

所述富集培养阶段：初始搅拌转速为300rpm，通气量为0.8vvm～1.5vvm，通过调节搅拌转速，维持发酵液溶氧为30％±5％，搅拌转速不超过750rpm，发酵液的pH值为6.0±0.2；

所述诱导培养阶段：温度为26℃～32℃，pH为5.8～6.2，通气量为0.8vvm～1.5vvm。

9.根据权利要求5～8任一项所述的方法，其特征在于，

所述富集培养阶段，搅拌转速达到750rpm，溶氧下降又升高至50％以上，再次流加补料I以维持溶氧为30±5％，直至酵母湿重达到150g/L～200g/L，停止流加补料Ⅰ，饥饿培养耗尽甘油，结束富集培养阶段；

所述诱导培养阶段共诱导96h。

10.根据权利要求5～9任一项所述的方法，其特征在于，还包括收集上清、浓缩、疏水层析和离子交换层析的步骤，

所述浓缩采用分子量为3kDa的中空纤维柱；

所述疏水层析的柱填料为Phenyl；

所述离子交换层析的柱填料为DEAE。