[发明专利]氨氧化微生物对土壤硝化贡献的测量方法

说明书

本发明公开了一种氨氧化微生物对土壤硝化贡献的测量方法，包括以下步骤：步骤一、设定硝化潜势的测定方式；步骤二、三种微生物的区分：为了将三种硝化功能微生物‑‑‑‑氨氧化古菌(AOA)、氨氧化细菌(AOB)和完全硝化菌(comammox))的贡献区分开，通过对多抑制剂法进行改进从而将其区分开；从而测定不同土壤悬液的采样时间点下的NO₂^‑含量/NO₃^‑含量；步骤三、计算土壤的硝化潜势。采用本发明的方法准确测量氨氧化古菌、氨氧化细菌和完全硝化菌对土壤硝化贡献。

技术领域

本发明涉及一种对氨氧化古菌、氨氧化细菌和完全硝化菌对土壤硝化贡献的测量方法，并且通过结果的比较可以得到氨氧化古菌、氨氧化细菌和完全硝化菌的生态位关系。

背景技术

土壤中的硝化作用通常是指在土壤微生物的参与下，将土壤中的铵态氮(NH₄⁺-N)氧化为硝态氮(NO₃^--N)的过程。这个过程是通过微生物进行催化的其中重要的三个微生物为AOA(氨氧化古菌)、AOB(氨氧化细菌)和comammox(完全硝化菌)，科研人员已经对这三种微生物在各种生态环境种的行为做了很多的研究，但是对这三种微生物对硝化反应的贡献至今没有一个定论和准确的测量方法。目前一些常规的侧脸三者贡献的方法为先测量土壤总硝化能力，再通过单一的抑制剂抑制某种微生物后测量剩余两种微生物的硝化能力，随后和没有添加抑制剂处理的硝化能力乡间得到对应微生物的硝化能力。但是这种方法在实际操作种经常会出现负数的情况，因为这种方法完全忽略的微生物之间的互作，当抑制了某种微生物，则另外一种微生物的行为是未知的，两种微生物之间本来是互惠关系，其中一个被抑制，另一种也会被抑制，这样就会导致结果偏高。当两种微生物之间本来是竞争关系的时候，其中一个被抑制，另一种就会被激活，这样就会导致结果偏低甚至出现负数的情况。所以本发明内容就是对AOA、AOB和comammox对土壤硝化作用贡献的测定方法进行改经，加入微生物之间互作的影响，使得结果更加准确，测量方式更加通用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种氨氧化微生物对土壤硝化贡献的测量方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种氨氧化微生物对土壤硝化贡献的测量方法，包括以下步骤：

步骤一、设定硝化潜势的测定方式(通过硝化潜势来代表土壤硝化能力)：

将待测土壤制备成土壤悬液，摇床(180±20rpm)培养24h；

设置六个取样时间点；

每个取样时间均分别进行如下操作：吸取5ml培养后土壤悬液，与5ml KCl溶液(2mol L^-1)混合后震荡，而后离心，上清液过0.25mm滤膜后测定NO₂^-和NO₃^-含量；

说明：需要测定待测土壤的体积含水量；

步骤二、三种微生物的区分：

为了将三种硝化功能微生物----氨氧化古菌(AOA)、氨氧化细菌(AOB)和完全硝化菌(comammox)的贡献区分开，通过对多抑制剂法进行改进从而将其区分开；

具体如下：

1)、向10g待测土壤中加入100ml的磷酸盐缓冲液再添加NaClO₃至其终浓度为10mM；得添加NaClO₃的土壤悬液，命名为土壤悬液Ⅰ；

将土壤悬液Ⅰ按照步骤一的测定方式测定六个采样时间点下的NO₂^-含量，获得NO₂^-的浓度与采样时间对应的线性回归方程式，得到斜率R_AOA+AOB；