[发明专利]一种基于肽适体的赖氨酸生物传感器及其制备方法

权利要求书

1.一种基于肽适体的赖氨酸生物传感器，所述生物传感器包括分子识别元件，其特征在于，所述分子识别元件是被修饰的肽适体；所述肽适体序列如SEQ ID NO.1所示，所述肽适体的N末端被4个脯氨酸残基和1个半胱氨酸残基组成的空间单元修饰。

2.如权利要求1所述基于肽适体的赖氨酸生物传感器的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)分子识别元件固定界面的准备：使用物理打磨以及电化学清除的方法对玻碳电极进行预处理后，获得信号分子固定界面；

(2)使用电化学循环伏安法在经步骤(1)处理后的玻碳电极表面沉积聚苯胺；具体电化学条件为：0.1M苯胺溶于1.0M H₂SO₄中，使用循环伏安法在50mV/s条件下，从-0.2V扫描到0.8V，灵敏度为1×10^-4，循环圈数为8；

(3)将经步骤(2)处理后的玻碳电极浸润在2.0mM sulfo-SMCC溶液中以活化聚苯胺，室温浸泡1h，然后使用超纯水缓慢冲洗玻碳电极以除去活化溶液；

(4)将经步骤(3)处理的玻碳电极浸泡于0.2mg/ml的分子识别元件溶液中，室温孵化1h，之后超纯水缓慢冲洗，除去未孵化多肽。

3.如权利要求2所述基于肽适体的赖氨酸生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述玻碳电极的预处理过程为：依次使用粒径为1μm、0.3μm和0.05μm的Al₂O₃粉在麂皮上对玻碳电极进行打磨，然后依次使用超纯水、50％乙醇、1％硝酸和超纯水分别超声5min，将超声清洗后的玻碳电极置于浓度为1M的硫酸中于-0.3-1.6V之间进行循环伏安扫描，扫速为0.1V/s，扫描20圈直至得到稳定的循环伏安曲线，将玻碳电极表面浸没于超纯水中，即得信号分子固定界面，待用。

4.如权利要求3所述基于肽适体的赖氨酸生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述的超纯水是电阻率大于18MΩ*cm的超纯水。

5.基于权利要求1所述基于肽适体的赖氨酸生物传感器检测赖氨酸的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)将所述基于肽适体的赖氨酸生物传感器插入含有赖氨酸溶液的烧杯中，在电化学工作站运行的情况下，于0.7V电位下，富集150s。之后进行差分脉冲伏安法扫描其电化学响应信号。

6.如权利要求5所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中所述电化学工作站是使用Ag|AgCl电极作为参比电极，使用铂丝作为对电极。

7.如权利要求5所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，进行DPV信号扫描的溶液为0.2M的PBS溶液，其中K₂HPO₄和KH₂PO₄比例为1:1。

8.如权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述的检测方法在1nM～0.01mM范围内具有良好的线性关系；其线性方程为：

ΔI＝4.9396logc+64.2751(R²＝0.9978)

其中，c是赖氨酸浓度，ΔI是ΔI＝I-I₀，I是加入赖氨酸之前检测信号，I₀是加入赖氨酸之后检测信号。