[发明专利]一种叶黄素酯和玉米黄质酯的测定方法

说明书

本发明公开了一种叶黄素酯和玉米黄质酯的测定方法。该方法首先提取样品中的叶黄素酯和玉米黄质酯，然后利用酶解将叶黄素酯和玉米黄质酯转换为叶黄素和玉米黄质，最后利用高效液相色谱测定叶黄素和玉米黄质的含量并折算成叶黄素酯和玉米黄质酯。本发明采用酶解法和液相色谱技术相结合能够准确测定叶黄素酯和玉米黄质酯的含量，该方法广泛适用于软糖、片剂、胶囊剂等产品。

技术领域

本发明涉及保健食品、食品或药品的功效成分检测领域，尤其涉及片剂、胶囊、粉剂、软糖等制剂中叶黄素酯和玉米黄质酯功效成分含量的检测方法。

背景技术

叶黄素酯和玉米黄质酯是一种重要的类胡萝卜素脂肪酸酯，互为同分异构体，它广泛存在于万寿菊花、南瓜等植物体内，叶黄素酯在万寿菊花中含量最为丰富，高达30％至40％。在万寿菊花和其它植物中，叶黄素一般与脂肪酸(如月桂酸、棕桐酸等)结合成酯的形式存在。

叶黄素酯和玉米黄质酯的检测方法目前没有相关法规标准，已公开的发明专利如内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司的发明专利《测定叶黄素酯产品中叶黄素二棕榈酸酯含量的方法》(申请号201610189029.8)，该方法利用分光光度计进行测定，只能适用于原料，对于添加了多种其他成分的食品或保健食品，该方法无法准确测定。因此需要开发高效液相色谱法来准确测定食品或保健食品中叶黄素酯和玉米黄质酯的含量。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：克服以上现有技术存在的缺陷，提供一种准确测定食品或保健食品中叶黄素酯和玉米黄质酯的含量的方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种叶黄素酯和玉米黄质酯的测定方法，包括以下步骤：

步骤(1)：标准溶液的配置

分别称取适量叶黄素和玉米黄质对照品，用乙醇溶解，制成每1ml分别含0.5ug、1ug、2ug、4ug、8ug的标准溶液；

步骤(2)：酶溶液的制备

称取适量酶用水溶解，使溶液的酶活力浓度为2～10U/ml；

步骤(3)：样品溶液的制备

称取1.0～5.0g样品于50ml离心管中，分别加入5～10ml水、0.1～0.5g胰酶和0.1～0.5g果胶酶，在40～60℃恒温水浴中振摇溶解后，加入1～5g氯化钠和15～25ml溶剂Ⅰ继续在40～60℃恒温水浴中振摇10min，冷却至室温，加入10ml萃取剂振摇2min后离心，移取上清液层至50ml容量瓶中，重复萃取3～4次，用萃取剂定容至50ml；

精密吸取上述溶液1～5ml至25ml容量瓶中，氮气吹干，加入2～5ml溶剂Ⅱ超声溶解，再加入2～5ml酶溶液混匀，放入37℃水浴中酶解45min，冷却后用乙醇定容至25ml，用于高效液相色谱测定；

步骤(4)：设定高效液相色谱实验条件

色谱柱：YMC Carotenoid(250×4.6mm，5μm)或等效色谱柱；

流动相：甲醇与乙酸乙酯混合溶液；

流速：0.8～1.5ml/min；

检测波长：445nm；

柱温：30℃；

进样量：20ul；

步骤(5)：标准曲线的建立

将步骤(1)得到的标准溶液在步骤(4)的条件下进行液相分析，测得各标准溶液的峰面积，以各标准溶液峰面积为纵坐标，浓度为横坐标建立标准曲线；

步骤(6)：含量测定