[发明专利]一种叶黄素酯和玉米黄质酯的测定方法

权利要求书

1.一种叶黄素酯和玉米黄质酯的测定方法，其特征是，包括以下步骤：

步骤(1)：标准溶液的配置

分别称取适量叶黄素和玉米黄质对照品，用乙醇溶解，制成每1ml分别含0.5ug、1ug、2ug、4ug、8ug的标准溶液；

步骤(2)：酶溶液的制备

称取适量酶用水溶解，使溶液的酶活力浓度为2～10U/ml；

步骤(3)：样品溶液的制备

称取1.0～5.0g样品于50ml离心管中，分别加入5～10ml水、0.1～0.5g胰酶和0.1～0.5g果胶酶，在40～60℃恒温水浴中振摇溶解后，加入1～5g氯化钠和15～25ml溶剂Ⅰ继续在40～60℃恒温水浴中振摇10min，冷却至室温，加入10ml萃取剂振摇2min后离心，移取上清液层至50ml容量瓶中，重复萃取3～4次，用萃取剂定容至50ml；

精密吸取上述溶液1～5ml至25ml容量瓶中，氮气吹干，加入2～5ml溶剂Ⅱ超声溶解，再加入2～5ml酶溶液混匀，放入37℃水浴中酶解45min，冷却后用乙醇定容至25ml，用于高效液相色谱测定；

步骤(4)：设定高效液相色谱实验条件

色谱柱：YMC Carotenoid(250×4.6mm，5μm)或等效色谱柱；

流动相：甲醇与乙酸乙酯混合溶液；

流速：0.8～1.5ml/min；

检测波长：445nm；

柱温：30℃；

进样量：20ul；

步骤(5)：标准曲线的建立

将步骤(1)得到的标准溶液在步骤(4)的条件下进行液相分析，测得各标准溶液的峰面积，以各标准溶液峰面积为纵坐标，浓度为横坐标建立标准曲线；

步骤(6)：含量测定

将步骤(3)得到的样品溶液在步骤(4)的条件下进行液相分析，测得其峰面积，与标准曲线进行对比，得到其浓度，结合样品的称重，计算得到样品中叶黄素酯和玉米黄质酯的含量。

2.根据权利要求1所述的一种叶黄素酯和玉米黄质酯的测定方法，其特征是：所述步骤(6)中叶黄素酯和玉米黄质酯含量的计算公式为：

式中：

C样—由样品溶液的峰面积查标准曲线计算得到样品溶液的浓度，μg/mL；

W样—样品称重，g；

V—稀释体积，ml；

1.84—转换为二棕榈酸酯的换算系数。

3.根据权利要求1所述的一种叶黄素酯和玉米黄质酯的测定方法，其特征是：所述步骤(2)中酶为脂肪酶、胆固醇酯酶、磷脂酶。

4.根据权利要求1所述的一种叶黄素酯和玉米黄质酯的测定方法，其特征是：所述步骤(3)中溶剂Ⅰ为二甲亚砜、乙醇、异丙醇、四氢呋喃，萃取剂为正己烷、石油醚、乙醚、乙酸乙酯，溶剂Ⅱ为乙醇、异丙醇、丙酮、四氢呋喃。

5.根据权利要求1所述的一种叶黄素酯和玉米黄质酯的测定方法，其特征是：所述步骤(4)中甲醇与乙酸乙酯的混合溶液，其中乙酸乙酯占比10％～30％。

6.根据权利要求1所述的一种叶黄素酯和玉米黄质酯的测定方法，其特征是：所述的样品是食品或保健食品中的片剂、胶囊、粉剂、软糖制剂。