[发明专利]一种提高菊花抗蚜性的基因CmMYB15-like的植物表达载体及应用

权利要求书

1.一种提高菊花抗蚜性的基因CmMYB15-like，其特征在于，所述基因CmMYB15-like的序列如SEQ ID No：1所示。

2.根据权利要求1所述的基因CmMYB15-like，其特征在于，所述基因CmMYB15-like来源于菊花‘神马’的SG2 R2R3MYB家族基因。

3.一种权利要求1或2所述的基因CmMYB15-like的构建方法，其特征在于，包含以下步骤：

(1)将基因Cm4CL2启动子区的顺式作用元件ACCTACC、ACCAACC分别串联重复构建序列如SEQ ID No：2、SEQ ID No：3所示的MYB转录因子结合元件AC-I、AC-II，然后构建至pHIS2载体，筛选菊花酵母单杂交文库；

(2)参考AC-I、AC-II设计获得AC突变作用元件AAATATT，将AC突变作用元件串联重复构建序列如SEQ ID No：4所示的突变结合元件mAC，然后构建pHIS2载体作为阴性对照。

4.一种提高菊花抗蚜性的基因CmMYB15-like的植物表达载体，其特征在于，含有权利要求1～2任一所述的基因CmMYB15-like。

5.一种提高菊花抗蚜性的基因CmMYB15-like的植物表达载体的构建方法，其特征在于，包含以下步骤：

(1)菊花CmMYB15-like基因的克隆

以菊花‘神马’材料的cDNA为模板，根据CmMYB15-like基因序列信息设计开放阅读框特异性引物CmMYB15-like-F和CmMYB15-like-R，进行PCR反应，产物与pMD19-T载体进行连接，转化DH5α感受态细胞，克隆获得序列为SEQ ID NO：1的菊花CmMYB15-like基因；

基因克隆引物：

CmMYB15-like-F：ATGGGGAGAGCACCTTGTTG，

CmMYB15-like-R：TTAAAACTCAGGTAACTCGG；

(2)入门载体pENTRY^TM1A-CmMYB15-like的构建

以包含CmMYB15-like基因序列的pMD19-T-CmMYB15-like质粒为模板，上下游分别引入含有BamH I和Xho I而不含有pENTRY^TM1A载体的CmMYB15-like基因酶切位点，设计引物CmMYB15-like-GATE-F和CmMYB15-like-GATE-R，进行PCR反应，将产物与pENTRY^TM1A载体分别由BamH I和Xho I双酶切并连接，构建入门载体pENTRY^TM1A-CmMYB15-like；

入门载体构建引物：

CmMYB15-like-GATE-F：CGGGATCCGGATGGGGAGAGCACCT，

CmMYB15-like-GATE-R：CCGCTCGAGTGAAACTCAGGTAACTC；

(3)植物表达载体pMDC43-CmMYB15-like的构建

将入门载体pENTRY^TM1A-CmMYB15-like阳性质粒经Pvu I单酶切线性化后与pMDC43质粒进行LR重组反应，构建提高菊花抗蚜性的基因CmMYB15-like的植物表达载体pMDC43-CmMYB15-like。

6.一种权利要求1～2任一所述的提高菊花抗蚜性的基因CmMYB15-like或权利要求4所述的提高菊花抗蚜性的基因CmMYB15-like的植物表达载体在培育抗蚜转基因植物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，以菊花‘神马’为材料获得抗蚜性基因CmMYB15-like，构建植物表达载体，通过农杆菌介导法导入菊花‘神马’。