[发明专利]一种逆转生物年龄制剂及其制备方法

说明书

本发明涉及一种制备逆转生物年龄制剂的方法，步骤包括：将细胞毒性T淋巴细胞与细胞有丝分裂原、细胞因子以及免疫佐剂置于培养容器内的液态细胞培养基中共同培养，以获得免疫细胞培养物，并从所述免疫细胞培养物中分离具有免疫活性的细胞群，即得所述逆转生物年龄制剂。使用本发明的逆转生物年龄制剂能够明显逆转生物年龄，含10¹⁰细胞毒性T淋巴细胞的逆转生物年龄制剂在一周内分三次使用，连续使用3个月后生物年龄逆转1.3年，连续使用9个月后生物年龄逆转4.5年。

技术领域

本发明涉及生物制剂技术领域，尤其涉及一种逆转生物年龄制剂及其制备方法。

背景技术

目前，通过人生长激素(GH)或/和GH释放剂、脱氢表雄酮(DHEA)以及二甲双胍的组合可使得老年人的胸腺再生，以防止老年人的年龄相关免疫功能障碍(免疫衰老)或恢复免疫功能(免疫衰老的逆转)，这种免疫衰老的逆转通过基因芯片的测试，被定义为生物表观年龄(生物年龄)的逆转。但长期使用上述组合可能会对人体产生毒性，以及其他可能的副作用。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种逆转生物年龄制剂及其制备方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

本发明的第一方面是提供一种制备逆转生物年龄制剂的方法，步骤包括：

将细胞毒性T淋巴细胞与细胞有丝分裂原、细胞因子以及免疫佐剂置于培养容器内的液态细胞培养基中共同培养，以获得免疫细胞培养物，并从所述免疫细胞培养物中分离具有免疫活性的细胞群，即得所述逆转生物年龄制剂。

优选地，所述细胞毒性T淋巴细胞的浓度为1×10³个/mL-1×10¹¹个/mL。

优选地，所述细胞有丝分裂原选自刀豆素、植物血凝素、美洲商陆、脂多糖或葡聚糖中的至少一种。

优选地，所述细胞有丝分裂原的浓度为10万单位/L-1000万单位/L。

优选地，所述细胞有丝分裂原的浓度为0.1mg/L-10mg/L。

优选地，所述细胞因子选自淋巴因子、单核因子、激活炎症的细胞因子或刺激造血的细胞因子中的至少一种；所述淋巴因子来源于淋巴细胞、单核细胞或产生淋巴因子的细胞。

优选地，所述细胞因子选自白细胞介素、干扰素、集落刺激因子、趋化性细胞因子或转化生长因子中的至少一种。

优选地，所述细胞因子选自白细胞介素-2、白细胞介素-6、白细胞介素-15或干扰素中的至少一种。

优选地，所述细胞因子的浓度为20万单位/L-500万单位/L。

优选地，所述免疫佐剂选自生物性佐剂、无机佐剂、有机佐剂、合成佐剂、油剂或弗氏佐剂中的至少一种。

优选地，所述免疫佐剂的浓度为0.01mL/L-1mL/L。

优选地，所述培养容器为三维大体积高密度细胞培养容器。

优选地，所述共同培养的时间为3天-180天。

优选地，步骤还包括：以所述免疫细胞培养物，或所述细胞群为原料，在所述液态细胞培养基中进行克隆，以获得具有免疫活性的细胞株。

优选地，所述克隆选自间歇循环刺激法或连续刺激法中的任意一种。

本发明的第二方面是提供一种如上所述方法制得的逆转生物年龄制剂。

本发明的第三方面是提供一种检测如上所述逆转生物年龄制剂对基因甲基化表达水平变化的方法，所述方法包括：采用基因甲基化芯片进行检测。