[发明专利]一种不同癌基因的单分子拓扑结构鉴别方法

说明书

本发明属于分子检测技术领域，具体涉及一种不同癌基因的单分子拓扑结构鉴别方法。本发明提供的不同癌基因的单分子拓扑结构鉴别方法，采用固态纳米孔平台技术，在施加偏压下获得待测样本通过所述固态纳米孔产生的电学信息，通过分析相对离子阻塞电流值对待测样本进行鉴别。该方法简单灵敏，操作便捷，可靠性好，实现了对不同序列富G癌基因形成的G4拓扑结构的鉴别，对于癌基因的结构分型及在特定生理功能区与特异蛋白的单分子作用机制研究具有重要意义。

技术领域

本发明属于分子检测技术领域，具体涉及一种不同癌基因的单分子拓扑结构鉴别方法。

背景技术

B淋巴细胞瘤-2基因简称BCL-2，是凋亡分子机制研究的主要靶分子。它具有明显抑制细胞凋亡的作用，并且近年来的一些研究已开始揭示这一作用的机制。人体端粒序列(hTel)存在于人类染色体末端端粒区域，与癌症疾病及衰老有关。它能够保护DNA不被降解，在每个复制周期后会缩短，经过一系列循环后，由于变得太短而无法保护DNA，细胞将会死亡。AS1411是可以与核仁素特异性结合的DNA单链，而核仁素在多种肿瘤细胞中均有表达，并且核仁素也参与了很多重要的细胞生理活动，所以AS1411对于核仁素的靶向性对于抗肿瘤药物具有很大的研究价值。

传统的鉴别基因结构的方法包括：核磁共振(NMR)、圆二色谱(CD)、原子力显微镜(AFM)、凝胶电泳及光镊和磁镊等技术，尽管这些研究方法都已经被证实可以进行癌基因结构的鉴别，但是它们都存在一定局限。这些技术大多需要大型设备，测试样品需求量也比较多，并且操作复杂，对操作人员的技术要求较高，且大多只能获取体相分子的平均信息。

纳米孔具有检测迅速、成本低、可进行单分子检测等优势，为不同癌基因的结构鉴别指出了新的方向。常用的实验技术是在纳米孔两端加一个电压，通过电场驱动，使DNA分子从孔一端电泳通过纳米孔，在外电路收集的离子电流会出现一个突然下降，电流的突然下降值和阻滞时间，可以对应DNA的生物学信息。但是单纯使用电场调节，DNA的穿孔速度太快。只有延长DNA分子的穿孔时间，减慢DNA的穿孔速度，才有可能实现对不同碱基的分辨。

申请号为202010521146.6的发明专利公开了一种硅基固态纳米孔的制备方法，用所述硅基固态纳米孔来进行DNA和/或RNA的测序，可以提高纳米孔测序的成功率。

发明内容

鉴于上述问题，本发明在基于固态纳米孔检测的平台技术上，提供了一种不同癌基因的单分子拓扑结构鉴别方法。

本发明的目的之一，在于提供一种基于固态纳米孔对富G癌基因鉴别的方法，该方法为不同癌基因的单分子拓扑结构的鉴别提供了新思路。

为实现上述目的，本发明采取以下技术方案：

所述的方法为用固态纳米孔对检测样品的相对离子阻塞电流值进行测定和分析；所述固态纳米孔的孔径为3～5nm；所述检测样品为含有一种或多种富G癌基因的溶液。

进一步，所述的检测样品浓度为纳摩尔。

进一步，所述的方法为鉴别富G癌基因的G4结构。

进一步，所述的方法具体包括以下步骤：

S1：富G癌基因G4结构的制备；

S2：固态纳米孔的制备；

S3：在施加偏压的情况下检测S1所得富G癌基因G4结构穿过S2所得固态纳米孔产生的相对离子阻塞电流值；

其中S1与S2顺序不限。

进一步，S2中所述的固态纳米孔载体为硅基氮化硅薄膜。

进一步，S3中所述的施加偏压范围为100mv～200mv。

进一步，S3中所述的施加偏压为100mv、150mv、200mv。