[发明专利]地衣芽孢杆菌的制备方法

说明书

本发明提供地衣芽孢杆菌的制备方法，涉及发酵工程技术领域。该基于地衣芽孢杆菌的制备方法，包括步骤一：培养基制备，S1.1、斜面培养基，S1.2、种子培养基，S1.3、发酵培养基；步骤二：菌种活化，保存在超低温冰箱里的地衣芽孢杆菌菌管取出，在无菌条件下用接种环接入到斜面培养基上，保持37℃，培养24小时，进行菌种活化；步骤三：加热处理，将活化好的菌种，用灭好菌的生理盐水在无菌条件下制成悬液，80℃水浴10分钟；步骤四：种子培养；步骤五：发酵培养，将培养好的菌种按1%的接种量接种到发酵培养基中，保持37℃，240r/min，培养24小时。通过采用振荡培养，使得培养基与氧气充分接触，提高溶解氧的供应量，使地衣芽孢杆菌的菌体繁殖均一，培养效率高。

技术领域

本发明涉及发酵工程技术领域，具体为地衣芽孢杆菌的制备方法。

背景技术

地衣芽孢杆菌细胞形态和排列呈杆状、单生，可调整菌群失调达到治疗目的，可促使机体产生抗菌活性物质、杀灭致病菌。能产生抗菌活性物质，并具有独特的生物夺氧作用机制，能抑制致病菌的生长繁殖。

地衣芽孢杆菌是一种在土壤中常见的革兰氏阳性嗜热细菌，在鸟类，特别是居住在地面的鸟类和水生的鸟类的羽毛中也能找到这种细菌，特别是在其胸部和背部的羽毛中，酶分泌的最适温度为37℃，它可能以孢子形式存在，从而抵抗恶劣的环境；在良好环境下，则可以生长态存在，该细菌可调整菌群失调达到治疗目的，可促使机体产生抗菌活性物质、杀灭致病菌，能产生抗活性物质，并具有独特的生物夺氧作用机制，能抑制致病菌的生长繁殖，其具备促进肠道内正常生理性厌氧菌的生长，调整肠道菌群失调，恢复肠道功能，并且对肠道细菌感染具有特效，对轻型或重型急性肠炎，轻型及普通型的急性菌痢等，均有明显疗效。

现有的技术中，由于地衣芽孢杆菌的制备环境大多系数变化较大，环境参数控制不稳定，多数会出现产品中携带大量杂菌，杂菌与地衣芽孢杆菌同时摄取培养基中的营养，导致地衣芽孢杆菌的质量低、产量少，十分耗费资源，且现有的地衣芽孢杆菌培养时还存在菌体繁殖不均一，培养效率低等问题。

发明内容

（一）解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了地衣芽孢杆菌的制备方法，解决了现有的地衣芽孢杆菌培养时菌体繁殖不均一，培养效率低且因制备环境变化系数较大而导致产品中携带大量杂菌，从而导致地衣芽孢杆菌的质量低、产量少的问题。

（二）技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：地衣芽孢杆菌的制备方法，包括以下步骤：

步骤一：培养基制备

S1.1、斜面培养基：蛋白胨3g/L、葡萄糖4g/L、氯化钠1g/L、酵母膏0.5g/L、尿素5g/L、琼脂粉20g/L、蒸馏水补足至1000ml，pH值6.5-7.0；

S1.2、种子培养基：蛋白胨1g/L、蔗糖13g/L、氯化钠1g/L、玉米淀粉15g/L、玉米浆粉16g/L、黄豆饼粉20g/L、牛肉膏0.5g/L、蒸馏水补足至1000ml，pH值7.0-7.5；

S1.3、发酵培养基：葡萄糖20g/L、玉米淀粉5g/L、黄豆饼粉20g/L、尿素5g/L、磷酸氢二钾6g/L、磷酸二氢钾3g/L、酵母膏0.5g/L、硫酸镁1g/L、碳酸钙1g/L、蒸馏水补足至1000ml，pH值7.0-7.5；

步骤二：菌种活化

首先将保存在超低温冰箱里的地衣芽孢杆菌菌管取出，操作人员在无菌条件下用接种环接入到斜面培养基上，将斜面培养基的温度保持在37℃，培养24小时，进行菌种活化；

步骤三：加热处理

将活化好的菌种，用灭好菌的生理盐水在无菌条件下制成悬液，80℃水浴10分钟；

步骤四：种子培养

取一环活化灭菌好的菌种，在无菌条件下用接种环接入种子培养基内，保持37℃，160r/min，培养18小时；

步骤五：发酵培养