[发明专利]一种黄芪中化学成分的分离方法及其应用

说明书

本发明关于中药成分分析技术领域，尤其涉及一种黄芪中化学成分的分离方法及其应用。本发明所提供的分离方法基于离线三维液相色谱高分辨质谱联用技术，通过使用分离机制不同的色谱柱以及特定的流动相、流速和洗脱梯度，提高了色谱的峰容量，并获得了良好的分离度，可对黄芪进行低含量成分的分离与鉴定，从而能够用于黄芪系统物质基础研究，实现黄芪中化学成分的深度表征。

技术领域

本发明关于中药成分分析技术领域，尤其涉及一种黄芪中化学成分的分离方法及其应用。

背景技术

中药以及中药方剂(复方)是我国传统中医药的重要组成，在中医理论的指导下发挥疾病预防及治疗的作用。黄芪即是一味使用广泛的传统中药，其源自于豆科植物蒙古黄芪(Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao)和膜荚黄芪(Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.)干燥的根，具有抗骨质疏松、调节免疫活性、抗肝纤维化、抗动脉硬化等作用。

中药是一种复杂的化学体系，其典型特征是初级和次级代谢产物共存，表现出分子量、极性、酸碱性质和含量等范围分布广泛。液相色谱/质谱(LC/MS)联用技术当前是中药物质基础较为常用的手段，但传统的一维色谱分离表现出有限的选择性和峰容量，共洗脱现象往往比较严重，这在很大程度上限制了次要成分的暴露，从而导致难以通过常规的液相色谱/质谱联用技术来对中药进行全面的分析和表征。

发明内容

针对以上技术问题，本发明提供一种黄芪中化学成分的分离方法及其应用，本发明的分离方法基于离线三维液相色谱高分辨质谱联用技术，能够同时开展蒙古黄芪和膜荚黄芪系统物质基础研究，实现两种黄芪品种化学成分的深度表征。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

一种黄芪中化学成分的分离方法，具体包括以下步骤：

S1、用甲醇对待测样品进行提取，得待测溶液；

S2、将所述待测溶液经半制备液相色谱进行第一维色谱分离，色谱条件为：

色谱柱：中性酰胺键合硅胶色谱柱；

流动相A为水，流动相B为0.095％～0.105％v/v甲酸乙腈溶液，进行线性梯度洗脱，流速为1.15～1.25mL/min；收集0～6min、6～10min、10～31min的洗脱液；所述线性梯度洗脱的程序如下：

S3、对第一维色谱分离得到的各时间段的洗脱液进行第二维色谱分离，色谱条件为：

色谱柱：氟苯基键合反相色谱柱；

流动相A为0.095％～0.105％v/v甲酸水溶液，流动相B为0.095％～0.105％v/v甲酸乙腈溶液，进行线性梯度洗脱，流速为0.095～0.105mL/min；所述线性梯度洗脱的程序如下：

S4、对第二维色谱分离得到的各时间段的洗脱液进行第三维色谱分离，色谱条件为：

色谱柱：C18反相色谱柱；

流动相A为水，流动相B为0.095％～0.105％v/v甲酸乙腈溶液，进行线性梯度洗脱，流速为1.95～2.05mL/min；所述线性梯度洗脱的程序如下：

S5、对第三维色谱分离后的洗脱液进行质谱检测。

该方法通过使用分离机制不同的色谱柱以及上述流动相、流速和洗脱梯度，极大地提高了色谱的峰容量，并获得了良好的分离度，从而能够开展蒙古黄芪和膜荚黄芪系统物质基础研究，实现两种黄芪品种化学成分的深度表征。