[发明专利]一种黄芪中化学成分的分离方法及其应用

权利要求书

1.一种黄芪中化学成分的分离方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

S1、用甲醇对待测样品进行提取，得待测溶液；

S2、将所述待测溶液经半制备液相色谱进行第一维色谱分离，色谱条件为：

色谱柱：中性酰胺键合硅胶色谱柱；

流动相A为水，流动相B为0.095％～0.105％v/v甲酸乙腈溶液，进行线性梯度洗脱，流速为1.15～1.25mL/min；收集0～6min、6～10min、10～31min的洗脱液；所述线性梯度洗脱的程序如下：

S3、对第一维色谱分离得到的各时间段的洗脱液进行第二维色谱分离，色谱条件为：

色谱柱：氟苯基键合反相色谱柱；

流动相A为0.095％～0.105％v/v甲酸水溶液，流动相B为0.095％～0.105％v/v甲酸乙腈溶液，进行线性梯度洗脱，流速为0.095～0.105mL/min；所述线性梯度洗脱的程序如下：

S4、对第二维色谱分离得到的各时间段的洗脱液进行第三维色谱分离，色谱条件为：

色谱柱：C18反相色谱柱；

流动相A为水，流动相B为0.095％～0.105％v/v甲酸乙腈溶液，进行线性梯度洗脱，流速为1.95～2.05mL/min；所述线性梯度洗脱的程序如下：

S5、对第三维色谱分离后的洗脱液进行质谱检测。

2.根据权利要求1所述的黄芪中化学成分的分离方法，其特征在于，所述第一维色谱分离、第二维色谱分离和第三维色谱分离的色谱条件中，检测波长为255～265nm。

3.根据权利要求1所述的黄芪中化学成分的分离方法，其特征在于，所述第一维色谱分离的所述色谱柱为XAmide色谱柱，规格为4.6×150mm，5μm；和/或

所述第二维色谱分离的所述色谱柱为ACQUITY UPLC CSH Fluoro-Phenyl，规格为2.1×100mm,1.8μm；和/或

所述第三维色谱分离的所述色谱柱为Cosmocore C18，规格为3×50mm,2.6μm。

4.根据权利要求1所述的黄芪中化学成分的分离方法，其特征在于，所述第一维色谱分离的柱温为30～40℃；和/或

所述第二维色谱分离的柱温为25～35℃；和/或

所述第三维色谱分离的柱温为20～30℃。

5.根据权利要求1所述的黄芪中化学成分的分离方法，其特征在于，所述第一维色谱分离的色谱条件中，所述甲酸乙腈溶液中的甲酸浓度为0.1％v/v，所述流速为1.2mL/min。

6.根据权利要求1所述的黄芪中化学成分的分离方法，其特征在于，所述第二维色谱分离的色谱条件中，所述甲酸水溶液中的甲酸浓度为0.1％v/v，所述甲酸乙腈溶液中的甲酸浓度为0.1％v/v，所述流速为0.1mL/min。

7.根据权利要求1所述的黄芪中化学成分的分离方法，其特征在于，所述第三维色谱分离的色谱条件中，所述甲酸乙腈溶液中的甲酸浓度为0.1％v/v，流速为2.00mL/min。

8.根据权利要求1所述的黄芪中化学成分的分离方法，其特征在于，所述质谱采用四极杆飞行时间质谱。

9.根据权利要求8所述的黄芪中化学成分的分离方法，其特征在于，所述质谱的质谱条件包括：柱后分流比为(2～6):1；采集模式使用Auto MS/MS，MS扫描范围m/z 100-1500，采集速率为3spectra/s；MS/MS扫描范围m/z50-1500，采集速率为4spectra/s；分离宽度：中等，每个一级质谱数据中选择前3强离子进行二级质谱裂解。

10.权利要求1～9任一项所述的黄芪中化学成分的分离方法在表征黄芪中化学成分中的应用。