[发明专利]一种脱氧雪腐镰刀菌烯醇高灵敏免疫的检测方法

说明书

本发明公开了一种脱氧雪腐镰刀菌烯醇高灵敏免疫的检测方法，以SMWCNTs为载体，荷载GAM‑HRP，构建通用型的多酶信号颗粒，建立了多酶辅助信号放大的呕吐毒素免疫分析方法；相较于间接竞争ELSA方法，该方法的灵敏度提高了约5倍；同时具有良好的特异性、准确性。对大米、小麦和玉米加标实验中，回收率在87.65%～114.50%之间；在本地购买的15个谷物样本中DON检出浓度在＜LOD~147.64ng/g，检出率为53.33%。本发明的检测方法操作简单、快速、灵敏度高，可为谷物中真菌毒素及其他污染物的检测与监测提供有力的技术保障。

技术领域

本发明涉及辊边成型装置领域，尤其是一种脱氧雪腐镰刀菌烯醇高灵敏免疫的检测方法。

背景技术

真菌毒素是真菌产生的次级代谢产物，极易在作物生长、收获及粮食储藏过程中产生。在我国，由于传统饮食习惯中谷物的消费比例大大高于西方国家，使得真菌毒素的危害显得尤为突出。其中，脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol，DON)是从禾谷镰刀菌污染的玉米中分离出来的一种真菌毒素，并且是粮食作物中常见的污染毒素之一，因其能够引起呕吐，故又称呕吐毒素。DON直接污染谷类等农作物，从而进入人或动物体内，能够诱发呕吐，导致动物出现厌食、胃肠炎、腹泻、生长缓慢，甚至还会产生免疫抑制或是血液病等。有研究表明，90％感染真菌毒素的样本里都含有DON。我国规定谷物及其制品中DON的限量标准为1mg/kg，联合国食品添加剂专家委员会规定人体对DON及其衍生物每日最大耐受摄入量为1μg/kg。郭红卫等在对我国河南地区及上海市赤霉病流行年份与非流行年份小麦中镰刀菌污染情况进行调査时，发现DON含量的中位数分别为933.0mg/kg和14.2mg/kg，远超出我国规定的限量标准。

常规真菌毒素检测以仪器分析方法为主，包括高效液相色谱法、液质联用等技术，尽管灵敏度高、准确性好，但是需要专业技术人员，仪器设备昂贵，前处理过程复杂，不能满足大规模样本快速分析需要。免疫分析方法具有灵敏度高、特异性好等优点，适用于大量样本的现场筛查，已在食品安全、环境监测、临床诊断等领域得到广泛应用。

免疫分析方法，以抗原-抗体特异性结合为基础，结合酶、荧光物质、纳米颗粒等报告分子，输出检测信号。凭借高效催化作用、专一性等特点，酶在免疫分析方法中应用最为广泛，为高灵敏度分析方法的构建提供了重要元件。借助纳米颗粒、聚合物、抗原-抗体、生物素-亲和素等系统，将多个酶共同组装在一起而形成的多酶颗粒，极大增加了单位反应单元的酶数量，提高了检测信号值，从而达到提升检测灵敏度的目的。

纳米科技的发展为多酶颗粒的制备提供了多种可能，新型的纳米材料，例如纳米金颗粒(AuNPs)、碳纳米管(Carbon nanotubes，CNTs)等，具有尺寸小、比表面积大、荷载量大等优势，可以作为酶的载体，并且这些纳米材料还可以较好的保存酶的催化活性，避免在苛刻条件下酶活性的丧失。

如何选取最为合适的载体，优化分析方法和条件，获取高灵敏度和精密度的检测方法尤其重要。

发明内容

发明目的：为了解决现有技术所存在的问题，本发明提供了一种脱氧雪腐镰刀菌烯醇高灵敏免疫的检测方法，大幅度提高了检测灵敏度。

技术方案：为达到上述目的，本发明可采用如下技术方案：一种脱氧雪腐镰刀菌烯醇高灵敏免疫的检测方法，包括以下步骤：

(1)进行SWCNTs多酶信号颗粒的制备：采用羧基化SWCNTs以及GAM-HRP进行制备；

(2)使用SWCNTs多酶信号颗粒进行建立DON间接竞争检测的标准曲线：计算半数抑制浓度(IC50)、最低检测限(IC90)和检测范围(IC20～IC80)。