[发明专利]一种脱氧雪腐镰刀菌烯醇高灵敏免疫的检测方法

权利要求书

1.一种脱氧雪腐镰刀菌烯醇高灵敏免疫的检测方法，其特征在于包括以下步骤：

进行SWCNTs多酶信号颗粒的制备：采用羧基化SWCNTs以及GAM-HRP进行制备；

使用SWCNTs多酶信号颗粒进行建立DON间接竞争检测的标准曲线：计算半数抑制浓度（IC50）、最低检测限（IC90）和检测范围（IC20~IC80）。

2.根据权利要求1所述的脱氧雪腐镰刀菌烯醇高灵敏免疫的检测方法，其特征在于：步骤（1）中所述SWCNTs多酶信号颗粒的制备方法如下：将羧基化SWCNTs，超声悬于MES溶液中，至SWCNTs完全分散；加入20-80μg的GAM-HRP，低温混合搅拌过夜；离心后去除上清液；将沉淀SWCNTs/GAM-HRP超声重悬于含有 BSA的MES溶液中，低温保存备用。

3.根据权利要求2所述的脱氧雪腐镰刀菌烯醇高灵敏免疫的检测方法，其特征在于：选取GAM-HRP的用量为80μg偶联在SWCNTs上形成信号放大探针。

4.根据权利要求3所述的脱氧雪腐镰刀菌烯醇高灵敏免疫的检测方法，其特征在于：GAM-HRP的用量为80μg的条件下的DON抗体浓度和多酶信号颗粒的用量分别为1:12000和1:20。

5.根据权利要求1所述的脱氧雪腐镰刀菌烯醇高灵敏免疫的检测方法，其特征在于：步骤（2）中使用SWCNTs多酶信号颗粒进行建立DON间接竞争检测的标准曲线的具体方法是：在酶标板中，每孔加入100 μL适量稀释的OVA-DON，4 ℃过夜；倒掉孔内液体，拍干后每孔加入封闭液200 μL；37 ℃孵育2 h，倒掉孔内液体，拍干；用0.01 mol/L，pH 7.4的PBS将DON标准品配制成系列浓度，每孔加入50 μL DON标准品，再加入50 μL适量稀释的DON抗体，37 ℃孵育30 min；用含0.5% Tween-20的PBS的PBST洗涤3次并拍干，每孔加入适量稀释的步骤（1）制备的SWCNTs多酶信号颗粒100 μL，37 ℃孵育30 min；PBST洗涤3次并拍干，每孔加新鲜配制的TMB显色液100 μL，37 ℃孵育10 min；每孔加终止液2 M 的H₂SO₄ 50 μL，检测吸光度OD450nm；以DON标准品浓度的对数为横坐标，B/B0为纵坐标绘制标准曲线，其中B为不同浓度标准品对应的OD值，B0为标准品浓度为0时对应的OD，即最大OD值。

6.根据权利要求5所述的脱氧雪腐镰刀菌烯醇高灵敏免疫的检测方法，其特征在于使用的封闭液为PBS溶液，pH值为7.4，离子强度为0.01 mol/L，最适有机溶剂用量具体为含1%明胶，20%甲醇。

7.根据权利要求1所述的脱氧雪腐镰刀菌烯醇高灵敏免疫的检测方法，其特征在于用于谷物样本中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测，回收率为87.65%～114.50%。