[发明专利]检测PDCoV的RT-RAA-LFD引物对、探针、试纸条、试剂盒及其应用

权利要求书

1.引物探针组合，其特征在于，所述引物的序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.16所示，所述探针的序列如SEQ ID NO.17所示。

2.根据权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于，所述探针的5’端进行生物素修饰，第32位碱基C被四氢呋喃(THF)替代，3’端进行磷酸化修饰；反向引物的5’端进行荧光基团FAM修饰；

所述探针序列如下：

5’-Biotin-GGTCCAGAGTACCGCTGTGAGGAGCCGCTTG[THF]TAAATTAGTAGGAGT-Phosphorylation-3’

所述反向引物序列如下：

5’-FAM-ACGTGTTAGGAACATATTATGATACGCATC-3’。

3.权利要求1-2任一项所述引物探针组合，在制备PDCoV的检测试剂盒或检测试纸条中的应用。

4.一种PDCoV的RT-RAA-LFD检测试剂盒，其特征在于，含有权利要求1-2任一项所述的引物探针组合。

5.根据权利要求4所述的RT-RAA-LFD检测试剂盒，其特征在于，所述RT-RAA-LFD检测试剂盒还包括，反应缓冲液和酶类。

6.根据权利要求5所述的RT-RAA-LFD检测试剂盒，其特征在于，所述酶类包括逆转录酶、重组酶、DNA聚合酶、单链DNA结合蛋白和核酸内切酶IV。

7.一种PDCoV核酸的检测试纸条，其特征在于，用于检测权利要求4-6任一项所述RT-RAA-LFD检测试剂盒，扩增得到的产物，所述检测试纸条包括：样品结合垫、检测线、质控线；所述样品结合垫含有胶体金标记的链霉亲和素、检测线(T线)含有鼠抗FAM的单克隆抗体、质控线(C线)含有偶联牛血清白蛋白(BSA)的生物素。

8.权利要求7所述检测试纸条的使用方法，其特征在于，包括：以待测样品中提取的RNA为模板，使用权利要求4-6任一项所述RT-RAA-LFD检测试剂盒，进行扩增，获得扩增产物，采用所述检测试纸条对所述扩增产物进行可视化判读；

结果判定标准为：阳性结果出现两条红色条带，一条位于检测线(T线)，另一条位于质控线(C线)；阴性结果仅在质控线(C线)出现一条红色条带，而在检测线(T线)无红色条带出现；若仅检测线出现红色条带，而质控线不出现红色条带，则为无效检测结果。

9.根据权利要求8所述的使用方法，其特征在于，所述扩增的反应条件为40℃恒温扩增10min。

10.权利要求1-2任一项所述的引物探针组合或权利要求4-6任一项所述的RT-RAA-LFD检测试剂盒或权利要求7所述的检测试纸条在可视化判定PDCoV感染中的应用。