[发明专利]谷氨酰胺在制备治疗干眼症的药物中的应用

说明书

本发明公开了谷氨酰胺在制备治疗干眼症的药物中的应用。本发明首次将L‑谷氨酰胺和D‑谷氨酰胺用于改善人角膜上皮细胞干眼模型，能够有效地改善干眼导致的角膜上皮细胞损伤以及炎症状态，且不同构型的谷氨酰胺对于干眼导致的角膜上皮损伤有同等的治疗效果。本发明探索新的治疗方法改善干眼疾病中角膜上皮的损伤，为干眼的治疗奠定基础。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体地说，涉及谷氨酰胺在制备治疗干眼症的药物中的应用。

背景技术

干眼是目前世界范围内最常见的眼病之一，其主要特征是泪膜稳态失衡伴发的多种眼表症状。过去研究发现干眼是一种慢性炎症性疾病，在某些情况下，急性干燥触发了免疫炎症介质的产生，刺激基质金属蛋白酶产生以及炎症细胞的募集。目前针对干眼的治疗，主要有两种环孢素和lifitegrast两种FDA批准的药物，它们通过一致T细胞激活和细胞因子产生从而达到治疗效果，但这两种治方法并不能有效改善所有患者的角膜上皮损伤。临床前研究已经确定代谢异常是干眼的主要病理生理变化，因此补充或干预小分子代谢物对于角膜上皮细胞损伤的改善具有重大临床意义。

发明内容

本发明的目的是提供谷氨酰胺在制备治疗干眼症的药物中的应用。

本发明的另一目的是提供一种干眼症细胞模型的构建方法。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供谷氨酰胺在制备治疗干眼症的药物中的应用。

所述谷氨酰胺为L-谷氨酰胺和/或D-谷氨酰胺。

第二方面，本发明提供一种干眼症细胞模型的构建方法，体外培养人角膜上皮细胞，并对细胞进行高渗处理，将处理后的细胞作为干眼症细胞模型。

进一步地，所述方法包括以下步骤：

(1)人角膜上皮细胞的培养：将人角膜上皮细胞置于含有10％胎牛血清和1％青霉素-链霉素双抗的DMEM/F12培养基中，于37℃5％CO₂条件下培养，每隔2-3天进行换液；

(2)干眼症细胞模型的建立：待细胞融合度至80％-90％后，换无血清DMEM/F12培养基培养24h后，将培养基更换为含90mmol/L NaCl的无血清DMEM/F12培养基，使培养基渗透到达到500±2mOsm，培养12h。

第三方面，本发明提供按照所述方法构建得到的干眼(高渗)细胞模型。

第四方面，本发明提供按照所述方法构建得到的细胞模型在干眼症治疗药物筛选或干眼症研究中的应用。

借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点及有益效果：

(一)本发明首次将L-谷氨酰胺和D-谷氨酰胺用于改善人角膜上皮细胞干眼模型，能够有效地改善干眼导致的角膜上皮细胞损伤以及炎症状态。

(二)不同构型的谷氨酰胺对于干眼导致的角膜上皮损伤有同等的治疗效果。

(三)本发明探索新的治疗方法改善干眼疾病中角膜上皮的损伤，为干眼的治疗奠定基础。

附图说明

图1为本发明较佳实施例中人角膜上皮细胞干眼造模后凋亡情况观察，进行高渗处理后12小时细胞凋亡显著增加。**表示不同处理组之间的差异具有统计学意义，**表示P0.01。

图2为本发明较佳实施例中人角膜上皮细胞干眼造模后炎症指标观察，进行高渗处理后12小时炎症因子mRNA水平显著增加。*、**和****表示不同处理组之间的差异具有统计学意义，*表示P0.05，**表示P0.01，****P0.0001。

图3为本发明较佳实施例中L-谷氨酰胺及D-谷氨酰胺治疗干眼模型，人角膜上皮细胞凋亡情况观察。