[发明专利]一种生长激素融合蛋白及其应用

说明书

本发明提出了一种生长激素融合蛋白及其应用。该融合蛋白包括一种Fc突变体，该突变体包括：第一肽链，其中，所述第一肽链1)相较于野生型IgG4Fc片段，具有如下位点的突变：第234位、第235位、第298位、第299位、第300位中的至少一位；或第231‑239位；或2)相较于野生型IgG1Fc片段，具有如下位点的突变：第228‑239位，和/或，第268位、第296位、第330位和第331位中的至少一位。所述融合蛋白与人源生长激素受体具有较强的结合活性，可以消除ADCC以及CDC效应，促进Nb2‑11细胞增殖，从而有效治疗或预防人生长激素异常相关疾病。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体地，本发明涉及一种生长激素融合蛋白及其应用，更具体地，本发明涉及一种Fc突变体、融合蛋白、核酸分子、表达载体、重组细胞、组合物、制药用途以及药物。

背景技术

生长激素缺乏症是一种公认的临床综合征，与许多代谢异常相关，包括身体成分异常、体能下降、脂质代谢改变、骨量减少、胰岛素抵抗增加和生活质量降低。大多数与生长激素缺乏症相关的代谢异常可通过重组人生长激素(rhGH)替代物逆转。传统的生长激素缺乏症治疗包括每天皮下注射rhGH。然而，注射时间过于频繁，对许多患者来说并不方便，引起了人们对治疗依从性差的担忧，这可能导致疗效降低。长效rhGH制剂不仅可以减少注射次数，从而提高依从性，并有助于提高GH治疗的疗效。

已有研究使用免疫球蛋白Fc制备融合蛋白，以增加融合蛋白的半衰期(CheolRyong Ku等人，Eur J Endocrinol.2018 Sep；179(3):169-179；Wolfgang Glaesner等人，Diabetes Metab Res Rev.2010May；26(4):287-96.)。由于生长激素生物学活性的发挥需要一定的空间效应，因此融合蛋白中Fc的连接不当会造成空间位阻效应。但研究发现，采用GGGGSGGGSGGGGS或Genexine GX-H9的部分片段与Fc进行连接，均存在对人生长激素受体结合力低，促进细胞增殖的活性低，及体外活性低等问题。

因此，仍亟需一种对人生长激素受体具有较高结合活性，能够促进T细胞增殖的融合蛋白。

发明内容

本申请是基于发明人对下列问题和事实的发现而提出的：

在本发明的的第一方面，本发明提出了一种Fc突变体。根据本发明的实施例，包括：第一肽链，其中，所述第一肽链1)相较于野生型IgG4 Fc片段，具有如下位点的突变：第234位、第235位、第298位、第299位、第300位中的至少一位；或第231-239位；或2)相较于野生型IgG1 Fc片段，具有如下位点的突变：第228-239位，和/或，第268位、第296位、第330位和第331位中的至少一位。发明人对IgG4或IgG1抗体的Fc片段分别进行上述突变，不同的位点进行突变具有不同的作用，根据本发明实施例的Fc突变体可以有效降低所述Fc片段制备过程中的碎片含量，避免其形成半抗体，并消除ADCC以及CDC效应，利用本申请所述Fc突变体制备的融合蛋白与人源生长激素受体具有较强的结合活性，可以消除ADCC以及CDC效应，促进Nb2-11细胞增殖，能够有效治疗或预防人生长激素异常相关疾病。

根据本发明的实施例，上述Fc突变体还可以进一步包括如下附加技术特征中的至少之一：

根据本发明的实施例，所述Fc突变体不能将第235位氨基酸突变为丙氨酸。

根据本发明的实施例，所述Fc突变体的序列不为SEQ ID NO:69。

Fc突变体排除序列(第一肽链6)(相较于野生型IgG4抗体的Fc片段具有F234V和L235A突变)的氨基酸序列：