[发明专利]一种基于代谢组差异筛选花蕾型灰毡毛忍冬的方法

说明书

本发明公开了一种基于代谢组差异筛选花蕾型灰毡毛忍冬的方法，属于灰毡毛忍冬品种筛选技术领域，该方法包括如下步骤：(1)样品准备：采集待测灰毡毛忍冬样品新鲜叶片，采集已确定的花蕾型灰毡毛忍冬和/或普通灰毡毛忍冬新鲜叶片，液氮速冻后于‑80℃保存；(2)样品提取；(3)UPLC‑MS/MS分析；(4)数据分析：根据待测灰毡毛忍冬样品与已确定的花蕾型灰毡毛忍冬和/或普通灰毡毛忍冬的UPLC‑MS/MS结果及数据分析确定差异代谢物，根据差异代谢物筛选待测灰毡毛忍冬样品中的花蕾型灰毡毛忍冬。本发明通过代谢物质在灰毡毛忍冬不同品种间的差异分析，在非花期即可早早筛选花蕾型灰毡毛忍冬品种。

技术领域

本发明属于灰毡毛忍冬品种筛选技术领域，具体涉及一种基于代谢组差异筛选花蕾型灰毡毛忍冬的方法。

背景技术

灰毡毛忍冬(Lonicera macranthoides)作为山银花的一种基原植物，其主要有效成分为绿原酸类化合物(Chlorogenic acids，CGAs)，且总绿原酸含量以花蕾期最高，其量随着花冠开裂而降低。普通灰毡毛忍冬花冠开裂，蕾期较短，一般为3～7天，规模化种植时不便于采收加工等农事操作，常造成丰产不丰收。近年来，科研人员在灰毡毛忍冬中发现了花期花冠一直不开裂的优良变异类型，并选育出了花蕾型灰毡毛忍冬新品种，该表型品种花期花冠一直不开裂，花蕾整齐均呈含苞未放的棒状，蕾期长达15-25天。花蕾型灰毡毛忍冬的推广种植显著提高了药农生产效率和经济效益。

目前，灰毡毛忍冬作为大宗药材山银花的主要基原植物，市场需求量大，品种繁多，不同产地不同品种间的灰毡毛忍冬化学成分存在差异，市面上品种混乱，鱼目混珠，难以甄别，导致药材山银花质量良莠不齐。现阶段对于中药山银花基原植物的品种鉴别，性状和显微鉴定等形态学鉴定方法已难以满足人们快速、精准需要，同时鉴定结果容易夹带主观色彩，可靠性较差。而针对有效成分的理化鉴定，更适宜于定性辨明中药材真伪，但对于通过有效成分含量多少来进行品种鉴定则区分效果不明显，同时还要依赖于不同分析化学方法中所需仪器设备的稳定性。尽管已有少量可用的分子标记，但灰毡毛忍冬的分子标记资源仍然匮乏。为了便于日后对山银花主要基原植物灰毡毛忍冬各品种进行准确的识别鉴定、保护和栽培以及开展相关的遗传研究，亟待提供一种在非花期即可早早筛选花蕾型灰毡毛忍冬品种的方法。

发明内容

本发明公开了一种基于代谢组差异筛选花蕾型灰毡毛忍冬的方法，通过代谢物质在灰毡毛忍冬不同品种间的差异分析，在非花期即可早早筛选花蕾型灰毡毛忍冬品种。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种基于代谢组差异筛选花蕾型灰毡毛忍冬的方法，包括如下步骤：

(1)样品准备：

采集待测灰毡毛忍冬样品新鲜叶片，采集已确定的花蕾型灰毡毛忍冬和/或普通灰毡毛忍冬新鲜叶片，液氮速冻后于-80℃保存；

(2)样品提取：

样品干燥后研磨成粉末，使用提取液提取，离心吸取上清，过滤，用于UPLC-MS/MS分析；

(3)UPLC-MS/MS分析；

(4)数据分析：

基于代谢数据库，利用软件Analyst 1.6.3和MultiaQuant 3.0.2对UPLC-MS/MS分析结果进行数据分析；

根据待测灰毡毛忍冬样品与已确定的花蕾型灰毡毛忍冬和/或普通灰毡毛忍冬的UPLC-MS/MS结果及数据分析确定差异代谢物，根据差异代谢物筛选待测灰毡毛忍冬样品中的花蕾型灰毡毛忍冬。

优选地，步骤(1)中，

叶片采集时间为花蕾期或非花蕾期。

优选地，步骤(2)中，