[发明专利]一种基于代谢组差异筛选花蕾型灰毡毛忍冬的方法

权利要求书

1.一种基于代谢组差异筛选花蕾型灰毡毛忍冬的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)样品准备：

采集待测灰毡毛忍冬样品新鲜叶片，采集已确定的花蕾型灰毡毛忍冬和/或普通灰毡毛忍冬新鲜叶片，液氮速冻后于-80℃保存；

(2)样品提取：

样品干燥后研磨成粉末，使用提取液提取，离心吸取上清，过滤，用于UPLC-MS/MS分析；

(3)UPLC-MS/MS分析；

(4)数据分析：

基于代谢数据库，利用软件Analyst 1.6.3和MultiaQuant 3.0.2对UPLC-MS/MS分析结果进行数据分析；

根据待测灰毡毛忍冬样品与已确定的花蕾型灰毡毛忍冬和/或普通灰毡毛忍冬的UPLC-MS/MS结果及数据分析确定差异代谢物，根据差异代谢物筛选待测灰毡毛忍冬样品中的花蕾型灰毡毛忍冬。

2.根据权利要求1所述的一种基于代谢组差异筛选花蕾型灰毡毛忍冬的方法，其特征在于，

步骤(1)中，

叶片采集时间为花蕾期或非花蕾期。

3.根据权利要求1所述的一种基于代谢组差异筛选花蕾型灰毡毛忍冬的方法，其特征在于，

步骤(2)中，

提取液为体积分数50％-70％的甲醇水溶液。

4.根据权利要求3所述的一种基于代谢组差异筛选花蕾型灰毡毛忍冬的方法，其特征在于，

步骤(2)中，

样品粉末加入提取液后4℃过夜提取，提取期间进行4-8次涡旋处理。

5.根据权利要求1所述的一种基于代谢组差异筛选花蕾型灰毡毛忍冬的方法，其特征在于，

步骤(2)中，

离心条件为转速10000g，10min；

过滤采用0.22μm微孔滤膜。

6.根据权利要求1所述的一种基于代谢组差异筛选花蕾型灰毡毛忍冬的方法，其特征在于，

步骤(3)中，

液相条件：

色谱柱WatersACQUITY UPLC HSS T3 C18 1.8μm，2.1mm*100mm；

流动相A相为添加有0.04v/v％乙酸的超纯水，B相为添加有0.04v/v％乙酸的乙腈；

洗脱梯度：0.00min B相比例为5％，10.00min内B相比例线性增加到95％，并维持在95％1min，11.00-11.10min，B相比例降为5％；并以5％平衡至14min；

流速0.35ml/min，柱温40℃，进样量4μl。

7.根据权利要求1所述的一种基于代谢组差异筛选花蕾型灰毡毛忍冬的方法，其特征在于，

步骤(3)中，

质谱条件：电喷雾离子源温度550℃，质谱电压5500V，帘气30psi。