[发明专利]一种检测动物性食品中林可霉素的方法

说明书

本发明公开了一种检测动物性食品中林可霉素的方法，涉及食品安全检测技术领域，包括以下步骤：取样品，粉碎，加入乙腈涡旋提取，取上清液；向样品残渣中再加入乙腈重复上述操作，取上清液；合并两次上清液，离心，取上清液，即为提取液；氮吹至近干，然后加入超纯水复溶，再加入饱和乙腈的正己烷溶液和C18粉除脂，保留水层；上C18固相萃取小柱过柱，用水淋洗，甲醇洗脱，收集洗脱液；氮吹至干，采用对甲苯磺酰异氰酸酯衍生化处理，用流动相复溶，过0.22μm滤膜，采用高效液相色谱‑紫外检测器进行测定。本发明实现对猪脂肪、鸡脂肪、鸡肌肉、牛肌肉、猪肾、牛肾、羊肾中林可霉素残留的快速、准确的定性和定量分析。

技术领域

本发明涉及食品安全检测技术领域，尤其涉及一种检测动物性食品中林可霉素的方法。

背景技术

林可霉素(Lincomycin)又名洁霉素、林肯霉素，是由林可链霉菌产生的林可酰胺类抗生素，分子式为：C₁₈H₃₄N₂O₆S，分子量为406.54。在常温下为白色结晶性粉末，有微臭或特殊臭，味苦，易溶于水和甲醇，略溶于乙醇。林可霉素属于一种生长期抑菌剂，但在高浓度下，对高度敏感细菌也具有杀菌作用，其抗菌谱较窄，与红霉素、青霉素相似，对革兰氏阳性菌如肺炎链球菌、化脓性链球菌、绿色链球菌、溶血性链球菌和金黄色葡萄球菌作用较强。林可霉素作用机理是与病原菌的核蛋白体50S亚基结合，通过抑制肽酰基转移酶，而抑制肽链延长，使得细菌蛋白质合成受阻，从而抑制细菌生长。然而正因为林可霉素的应用范围广，效果好，养殖过程中不乏出现一些不恰当地使用情况，导致林可霉素通过食物链最终传给人类。中华人民共和国农业部制定的国标GB31650-2019规定了猪脂肪、鸡脂肪、牛肌肉中林可霉素的最大残留限量为100μg/kg，鸡肌肉中林可霉素的最大残留限量为200μg/kg，猪肾、牛肾、羊肾中林可霉素的最大残留限量为1500μg/kg。因此，建立一种前处理简单、灵敏度高、重现性好的鸡、猪脂肪，鸡、牛肌肉，猪、牛、羊肾中林可霉素的检测方法，以便能够对其进行准确定性和定量，从而保证动物性食品的产品质量。

目前，我国已经指定的林可霉素残留量检测方法的相关标准有(GB29685-2013)《动物性食品中林可霉素残留量的测定-气相色谱-质谱法》、(农业部1163号公告-2-2009)《动物性食品中林可霉素的残留检测-气相色谱法》等，气相色谱-质谱法和高效液相色谱-质谱法虽特异性强，能够对目标化合物进行确证，但仪器价格昂贵、对前处理要求更高。据相关文献报道化学发光免疫分析法(Chemiluminescence immunoassay，CLIA)、胶体金免疫层析法(Colloidal gold immunochromatography，GICA)、酶联免疫吸附法(Enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA)、分子印迹膜法(Molecularly imprinted membrane，MIMs)也能够对林可霉素进行检测，但只适用大量样本的筛查，不能准确进行定性和定量分析。

发明内容

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种检测动物性食品中林可霉素的方法，通过对7种动物性食品的处理液进行对甲苯磺酰异氰酸酯衍生化处理，进而利用高效液相色谱-紫外检测器能够快速、准确的进行定性和定量分析。

本发明提出的一种检测动物性食品中林可霉素的方法，包括以下步骤：

S1、取样品，粉碎，向其中加入乙腈，涡旋提取、超声、振荡，离心，取上清液；向样品残渣中再加入乙腈重复上述操作，取上清液；合并两次上清液，离心，取上清液，即为提取液；

S2、将提取液用氮吹至近干，然后加入超纯水复溶，再加入饱和乙腈的正己烷溶液和C18粉除脂，保留水层，即为复溶液；

S3、将复溶液上C18固相萃取小柱过柱，用水淋洗，甲醇洗脱，收集洗脱液；

S4、将洗脱液氮吹至干，经对甲苯磺酰异氰酸酯衍生化；用甲醇终止反应后，氮吹至干；