[发明专利]一种培养肿瘤干细胞的试剂盒及其应用

说明书

本发明属于干细胞培养技术领域，公开了一种培养肿瘤干细胞的试剂盒及其应用。本发明提供了一种试剂盒，包含：明胶、透明质酸和交联剂；所述交联剂为谷氨酰胺转氨酶、戊二醛、1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺、N‑羟基琥珀酰亚胺、京尼平中的至少一种；该试剂盒可用于制备水凝胶，制备得到的水凝胶可用于培养肿瘤干细胞，培养的肿瘤干细胞在形态学、克隆形成率、ALDH阳性率表征等方面具有优异的效果，尤其与悬浮培养相比，其培养的肿瘤干细胞ALDH阳性率更高，能够更好地维持肿瘤干细胞干性。

技术领域

本发明属于干细胞培养技术领域，具体涉及一种培养肿瘤干细胞的试剂盒及其应用。

背景技术

传统肝癌治疗的的主要方法有手术切除、放疗、化疗和生物治疗等方法或多种方法联合，虽然癌症患者的肿瘤细胞减少了，但是肿瘤治疗效果差、复发转移率高且副作用大、精准性差等挑战急需解决。造成这一结果的根本原因是这些传统疗法主要针对的是已分化并处于增殖期的肿瘤细胞，而非肿瘤的根源—肿瘤种子细胞，即肿瘤干细胞(CSC)。越来越多的研究证明，肿瘤干细胞不仅对常规癌症治疗具有抵抗作用，而且会促发肿瘤的转移和复发。临床上90％的癌症死亡与肿瘤转移和复发有关，肿瘤干细胞在转移和复发过程中起决定性作用。因此，对肝癌干细胞的研究有重大的科学和临床意义，它会直接影响癌症治疗现有模式，从根本上提高癌症病人的生存几率和生活质量。

与正常组织干细胞一样，肿瘤干细胞也处在一个特定、复杂的微环境中，即肿瘤干细胞巢。肿瘤干细胞的微环境构成肿瘤微环境的一部分，如细胞外基质等。研究表明细胞外基质在协调耐药性、疾病进展和肿瘤转移方面发挥着关键作用。癌症的发病机制是一个复杂、多步骤的漫长过程，很难通过体内长期跟踪观察来研究肿瘤干细胞对癌症的作用机制。此外，肿瘤干细胞在肿瘤细胞中含量极低、分离困难，体外扩增培养容易丢失干性，给肿瘤干细胞的研究带来诸多困难。因此，培养肿瘤干细胞具有重大意义，它不仅有助于研究肿瘤干细胞在肿瘤发生发展及癌症转移和复发过程中的作用和机理，而且能为进一步研究肿瘤干细胞的靶向治疗策略和治疗剂奠定基础。

悬浮培养的方法是目前肿瘤干细胞培养最常用的培养方法之一。该方法将细胞接种于无血清培养基中，并采用超低黏附性的培养容器来减少细胞的贴壁，但是悬浮培养在CSC的培养中有着一些局限性：①在培养早期，CSC、前体细胞、和快速增殖期的细胞都可能形成肿瘤球；仅有不到6％的悬浮细胞可以连续传代6代以上；长期传代的细胞球数目少、耗时长；这使得该培养方法培养的细胞中非CSC的比例较高；②无细胞与细胞外基质间的联系。

发明内容

本发明第一方面的目的，在于提供一种培养肿瘤干细胞的试剂盒。

本发明第二方面的目的，在于提供一种水凝胶。

本发明第三方面的目的，在于提供第一方面的试剂盒和/或第二方面的水凝胶在培养肿瘤干细胞中的应用。

本发明第四方面的目的，在于提供一种培养肿瘤干细胞的方法。

本发明第五方面的目的，在于提供第四方面的方法在开发肿瘤药物中的应用。

为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一个方面，提供一种培养肿瘤干细胞的试剂盒，包含：明胶、透明质酸和交联剂；所述交联剂为谷氨酰胺转氨酶、戊二醛、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、京尼平中的至少一种。

优选地，所述交联剂为谷氨酰胺转氨酶。

优选地，使用时，所述明胶和透明质酸的混合质量比为1：(0.25～2)；进一步为1：(0.25～1)；更进一步为1：(0.5～1)。

优选地，使用时，所述明胶、透明质酸、交联剂的混合质量比为1：(0.25～2)：(0.01～0.03)；进一步为1：(0.25～1)：(0.01～0.03)；更进一步为1：(0.5～1)：0.02。