[发明专利]刺老苞粗提取物对肌肉细胞增殖作用

说明书

本发明涉及刺老苞研究技术领域，更具体的说是涉及一种刺老苞粗提取物对肌肉细胞增殖作用，本发明通过实验证实了刺老苞粗提物在一定浓度范围内可以促进成肌细胞的增殖，为今后开展刺老苞新的药理作用研究，即肌肉减少症的预防和治疗提供了可靠的实验数据支撑与理论依据。

技术领域

本发明涉及刺老苞研究技术领域,更具体的说是涉及刺老苞粗提取物对肌肉细胞增殖作用。

背景技术

刺老苞 Aralia echinocaulis Hand.-Mazz.为五加科楤木属植物楤木Araliachinensis L.或棘茎楤木A. echinocaulis Hand. Mazz的根皮或茎皮[1]，在我国分布广泛，生于森林中，垂直分布海拔可达2600 m[2]。刺老苞多根皮入药，药材呈片状、块状或槽状，气微香，嚼之带黏性，味辛，性平。归脾、肾二经，功能滋阴健肾，祛风湿，壮筋骨，散瘀血，消肿毒，可用于风湿痹痛、跌打损伤、骨折等治疗，临床应用时外敷、内服皆可[3]。

《滇南本草》曰:“刺脑包，又名刺老苞、鹊不宿。味苦、辛，性凉。归脾、肾经[4]。而脾主肌肉，肾主骨。目前对于刺老苞的研究多停留在骨质疏松、骨折等骨科疾病方面，而骨肌是一个有机整体，相互协调、密不可分[5]。在生长发育过程中肌量与骨量密切相关，老年期也是如此[6]。刺老苞根皮中主要含有皂苷、萜类、黄酮、鞣质等化学成分，具有保肝、抗炎、抗癌、提高免疫力等多种药理活性[7]。其中，刺老苞根皮中总多糖、总黄酮的含量分别为7.33%及0.92%，钙、镁、铯、镓、铜、锌等无机元素含量较高，尤其是铜、钙、铯元素的含量高过同类中草药10多倍[8-9]。研究发现，刺老苞根皮含药血清可通过延长原代成骨细胞 S 期，促进其增殖、分化及矿化功能的作用[10]，不同浓度刺老苞根皮醇提物可通过促进成骨细胞增殖和分化，加快骨基质矿化过程[11]。但关于刺老苞粗提物对肌肉细胞影响作用的研究几乎没有。

现阶段关于刺老苞的研究，多集中在成骨细胞增殖分化、骨质疏松症、骨折等骨科疾病方面，而关于其对成肌细胞增殖分化的研究几乎没有。目前已通过网络药理学初步证实刺老苞对肌肉减少症有一定的影响。

本专利提供了一种刺老苞粗提物的新用途，即刺老苞根皮醇提物可以促进成肌细胞的增殖，用于预防或治疗肌肉减少症。这对于开发肌类疾病药物提供了新的选择。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种刺老苞粗提取物对肌肉细胞增殖的作用。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案，刺老苞粗提取物的制备方法包括以下步骤：

1）预先准备实验材料及仪器；

2）对刺老苞根皮醇提物制备，以及对成肌细胞C2C12体外培养；

3）待C2C12细胞融合率达98%时，传代培养，

传代后的C2C12细胞接种于96孔板中，接种密度为5x10³ cm²，孔板周围一圈铺满PBS，以防挥发，24小时后用不同浓度刺老苞根皮醇提物分别处理C2C12细胞，并设置调零孔和空白对照孔，每组6个复孔，药物处理24 h后，每孔加入 10μl MTT 溶液和90μl基础培养基，继续培养4h后，加入DMSO溶解液，摇床摇匀10min；

4）在490nm处检测吸光度，计算细胞活力，重复进行3次独立实验。