[发明专利]刺老苞粗提取物对肌肉细胞增殖作用

权利要求书

1.一种刺老苞粗提取物，其特征在于，所述刺老苞粗提取物的制备方法包括以下步骤：

预先准备实验材料及仪器；

对刺老苞根皮醇提物制备，以及对成肌细胞C2C12体外培养；

待C2C12细胞融合率达98%时，传代培养，

传代后的C2C12细胞接种于96孔板中，接种密度为5x10³ cm²，孔板周围一圈铺满PBS，以防挥发，24小时后用不同浓度刺老苞根皮醇提物分别处理C2C12细胞，并设置调零孔和空白对照孔，每组6个复孔，药物处理24 h后，每孔加入 10μl MTT 溶液和90μl基础培养基，继续培养4h后，加入DMSO溶解液，摇床摇匀10min；

4）在490nm处检测吸光度，计算细胞活力，重复进行3次独立实验。

2.根据权利要求1中所述的一种刺老苞粗提取物，其特征在于，所述刺老苞根皮醇提物制备为称取5g刺老苞药材，放于研磨仪中研磨1.5 min直至样品呈粉末状；溶解于60 mL70% 甲醇提取液中；超声，每30min一次，每次停顿混匀，共超声6次；过滤，70℃旋蒸，置于冷冻干燥机中过夜干燥后备用。

3.根据权利要求1中所述的一种刺老苞粗提取物，其特征在于，所述复苏C2C12 细胞，接种于T75瓶内，在含10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素的DMEM 高糖培养基中传代培养，接种密度为5 x 10³ cm²。

4.置于37℃、5% CO₂ 恒温培养箱培养，次日换液，其余时间每2-3天换液一次，实验用细胞均处于对数生长期。

5.根据权利要求1中所述的一种刺老苞粗提取物，其特征在于，所述3）中的刺老苞根皮醇提物浓度分别为25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml，200μg/ml。

6.根据权利要求1中所述的一种刺老苞粗提取物，其特征在于，所述4）中的细胞活力计算方式为：细胞活力（%） = [A (加药)－A (调零)]/[A (空白对照)－ A (调零)] ×100%。