[发明专利]基于恶性疟重组蛋白的疟疾血清学监测方法

说明书

本发明公开了基于恶性疟重组蛋白的疟疾血清学监测方法，涉及疟疾监测技术领域，其技术方案要点是：将恶性疟原虫的MSP‑1₁₉作为特异性抗原包被在蛋白质芯片上，通过倍比稀释法筛选抗原并确定滤纸血洗脱血清稀释倍数和筛选抗原的最佳包被浓度，具体包括以下步骤：S1、芯片点制；S2、滤纸干血滴样本洗脱；S3、确定抗原包被浓度和滤纸血洗脱血清稀释倍数。本发明的方法是基于蛋白质芯片技术的疟疾血清学监测方法，该方法的敏感性高，检出效率好，对高风险阴性人群检出率高，能筛选出既往疟疾感染史人群；同时，该方法的特异性和板间操作一致性好，可作为疟疾消除和消除后阶段高效的血清学监测工具。

技术领域

本发明涉及疟疾监测技术领域，更具体地说，它涉及基于恶性疟 重组蛋白的疟疾血清学监测方法。

背景技术

疟疾被世界卫生组织(WHO)列为全球三大公共卫生问题之一， 在全球范围内造成严重的疾病负担。近年来随着一系列控制措施的开 展，如预防性服药和以青蒿素为基础的联合用药等，许多国家的疟疾 防控取得了显著成果并逐步迈向消除或消除后阶段。在该阶段，保持 疟疾零传播状态、防止再传播是消除后国家的首要任务，因此加大对 疟疾暴露风险的监测变得愈发重要。

疟疾消除后地区人群的暴露风险监测中，高灵敏度的血清学监测 方法逐渐受到重视。许多研究表明，感染者体内疟原虫清除后，大部 分抗体仍能持续数月甚至数年(具体时间取决于相应抗体的半衰期)， 对抗体标志物的检测可以反映人群既往和目前暴露情况。同时，将人 群各年龄段抗体阳性率数据拟合合适的催化模型，还可以预测人群的 年感染概率，评估人群的暴露风险，因此，血清学监测方法可以作为 疟疾消除后阶段监测的重要补充工具，建立基于重组抗原的血清学监 测方法也是疟疾消除地区研究的重点。

对于恶性疟疾，其高发于非洲热带地区，此种由恶性疟原虫感染 所致的传染病，常以畏寒、发热、头痛为首发症状，并发症多，若不 及时治疗，可危及生命。

现有技术中中对于恶心疟疾的监测，常用是采用基于间接ELISA 法的ELISA试剂盒进行检测分析，该现有常用方法的敏感性、检出效 率和对高风险阴性人群的筛查能力较低，且ELISA试剂盒不能区分具 体虫种。

因此，本发明旨在提供一种基于恶性疟重组蛋白的疟疾血清学监 测方法，以解决上述问题。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述问题，提供基于恶性疟重组蛋白的 疟疾血清学监测方法，本发明的方法是基于蛋白质芯片技术的疟疾血 清学监测方法，该方法的敏感性高，检出效率好，对高风险阴性人群 检出率高，能筛选出既往疟疾感染史人群；同时，该方法的特异性和 板间操作一致性好，可作为疟疾消除和消除后阶段高效的血清学监测 工具。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：基于恶 性疟重组蛋白的疟疾血清学监测方法，将恶性疟原虫的MSP-1₁₉作为 特异性抗原包被在蛋白质芯片上，通过倍比稀释法筛选抗原并确定滤 纸血洗脱血清稀释倍数和筛选抗原的最佳包被浓度，具体包括以下步 骤：

S1、芯片点制：

取一张包含14个区域，每个区域含256个孔的芯片，将经过倍 比稀释的PfMSP-1₉抗原通过点样仪点样于芯片的一个区域的256孔 中，点样完成后，将芯片置于点样仪基片载台固定过夜，然后再将其 放置于4℃冰箱内保存；

S2、滤纸干血滴样本洗脱：

将恶性疟阳性质控血清对应的20例滤纸干血滴样本和10例阴性 质控对应的滤纸干血滴样本洗脱，然后从903滤纸上剪下血量20μl 的滤纸并置于由PBS、0.5％牛血清白蛋白(BSA)和0.3％Tween20组 成的1ml洗脱液中，于4℃轻摇过夜洗脱，洗脱液用于后续检测；

S3、确定抗原包被浓度和滤纸血洗脱血清稀释倍数：