[发明专利]生物大分子蛋白转膜的方法

说明书

本发明公开了一种生物大分子蛋白转膜的方法，其步骤包括在上下层电极之间填充导电介质，所述导电介质包括下层介质、中层介质和上层介质，所述下层介质接触下层电极，所述上层介质接触上层电极，在中层介质和下层介质设一层用于截留蛋白质的膜；将待转膜的样本注入中层介质中；通电，使导电介质处于匀强电场中，每隔一段时间变换上下层电极的正负性，使匀强电场的方向改变，从而驱动样本在导电介质中反复穿梭；撤去电场，取下用于截留蛋白质的膜，即完成蛋白转膜。本发明采用往复循环转换电场方向的方式，使得样品中的蛋白质与膜反复接触，从而提高吸附在膜上的蛋白质的比例，提高检测灵敏度。

技术领域

本申请涉及一种生物大分子蛋白转膜的方法，属于生物技术领域。

背景技术

电泳是常见的分离蛋白质的方法，电泳的原理是生物多聚物如肽、蛋白质、核酸、寡糖等根据分子大小、电荷和其他物理性质的差异，在电场中迁移得到不同的带。将这些生物多聚物转移到NC膜(硝酸纤维素膜)、PVDF膜(聚偏二氟乙烯膜)等膜以后可以进行下一步的分析。

在蛋白转膜的过程中，传统的方法是单向电泳，蛋白质只与膜接触一次，在转膜过程中，只有部分蛋白会吸附在膜上，还有部分蛋白会透过膜，进入下一层介质中，影响转膜的效率和分析的准确率。

发明内容

本发明的目的是提供一种生物大分子蛋白转膜的方法，可以提高检测的灵敏度。

本发明采用的技术手段为：

一种生物大分子蛋白转膜的方法，其步骤包括：

在上下层电极之间填充导电介质，所述导电介质包括下层介质、中层介质和上层介质，所述下层介质接触下层电极，所述上层介质接触上层电极，在中层介质和下层介质设一层用于截留蛋白质的膜；

将待转膜的样本注入中层介质中；

通电，使导电介质处于匀强电场中，每隔一段时间变换上下层电极的正负性，使匀强电场翻转，从而驱动样本在导电介质中反复穿梭；

撤去电场，取下用于截留蛋白质的膜，即完成蛋白转膜。膜可用于后续的分析。

优选的，上层介质为含有10mmol到1mol浓度的磷酸盐、1％到50％体积比的乙醇或甲醇异丙醇的一种或多种的凝胶。

优选的，中层介质为凝胶。

优选的，下层介质为含有10mmol到1mol浓度的磷酸盐、1％到50％体积比的乙醇或甲醇异丙醇的一种或多种的凝胶。

优选的，所述电场强度为10V/cm到100V/cm,电场翻转周期为1S到30S，期间正向时间和反向时间的比值为5:1到10:1，电泳持续时间10到20分钟。

优选的，所述用于截留蛋白质的膜为NC膜或者PVDF膜。

本发明采用往复循环转换电场方向的方式，使得样品中的蛋白质与膜反复接触，从而提高吸附在膜上的蛋白质的比例，更好的将蛋白质与样本中其他成分分离，提高检测灵敏度。蛋白质的运动速度可以通过正负两电极之间的电流大小进行调节，整个转膜的时间可在20分钟之内完成。

具体实施方式

实施例1

本发明的生物大分子蛋白转膜的方法，其步骤包括：

在上下层电极之间填充导电介质，所述导电介质包括下层介质、中层介质和上层介质，所述下层介质接触下层电极，所述上层介质接触上层电极，在中层介质和下层介质设一层用于截留蛋白质的膜；其中上层介质为含有0.5mol浓度的磷酸盐的凝胶，中层介质为凝胶，下层介质为含有0.5mol浓度的磷酸盐的凝胶。

将待转膜的样本注入中层介质中；