[发明专利]一种氟苯尼考和替米考星双联检测试纸及制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种氟苯尼考和替米考星双联检测试纸及制备方法和应用，属于兽药残留分析和免疫学技术领域。该试纸包括抗氟苯尼考的单克隆抗体以及抗替米考星的单克隆抗体，能够同时检测氟苯尼考和替米考星。在单克隆抗体制备时，分别采用氟苯尼考、替米考星作为半抗原，与载体蛋白BSA的氨基进行偶联，制备氟苯尼考、替米考星人工完全抗原。所制备的人工完全抗原FF‑BSA、TIL‑BSA具有良好的免疫原性，免疫小鼠得到的两种单克隆单体均具备高特异性，高亲和力和高敏感性的优点，为制备氟苯尼考、替米考星双联检测试纸奠定基础。利用该试纸检测具有简便、快速、灵敏、准确、高通量等优点，可实现现场实时检测。

技术领域

本发明涉及兽药残留分析和免疫学技术领域，特别是涉及一种氟苯尼考和替米考星双联检测试纸及制备方法和应用。

背景技术

氟苯尼考(FFrfenicol，FF)又称氟甲砜霉素，是新一代氯霉素类动物专用抗生素，具有抗菌谱广、毒副作用小等特点，是农业部批准使用的动物专用抗菌药，被广泛应用于动物养殖业。尽管氟苯尼考毒性低于氯霉素，但由于不正确或超量的使用，势必造成氟苯尼考在畜禽水产品中的残留，特别是现已出现了对氟苯尼考耐药的菌株，而且氟苯尼考的用量呈上升的趋势，这对人类的身体健康造成了潜在的威胁。因此，研究其残留监控技术对保障人民身体健康和水产品食用安全具有重要意义。

大环内脂类抗生素作为一种广谱抗生素，根据分子结构中的碳内酯环可以将其分为12至16元大环内脂类抗菌药物，替米考星(TILmicosin，TIL)属于16元大环内酯类抗生素，是近年来新出现的一种由泰乐菌素经过合成得到的畜禽专用抗生素，主要用于治疗巴氏杆菌和牛的溶血性曼氏杆菌引起的感染。替米考星使用不当时，会引起畜禽呼吸急促，呕吐等不良反应，过量的使用，会出现致死现象，而且药物使用不当，会造成畜产品中出现兽药残留，进而对人体造成危害。

目前，检测氟苯尼考、替米考星残留量的方法主要是色谱分析法，如高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)，色谱分析法虽然灵敏、准确、分离度高并且可进行多残留检测的定性、定量研究，但是需要昂贵的仪器、繁琐的前处理、熟练的专业操作员。如果采用仪器分析法进行大批量样品的检测，其成本将非常高，而且在目前的国家检测机构中大部分只有省级才配备有精密的分析仪器，因此需要建立一个从筛选到确证的检测体系。有关氟苯尼考、替米考星的残留确证方法已经相对完善，但可用于大批量样品初筛的检测方法研究较少，免疫学检测法尤其是胶体金检测试纸具有快速、灵敏度高、操作简单、适应性强、高通量等优点，适合高通量样品筛选，因此对于快速检测氟苯尼考和替米考星在动物饲料、土壤或可食性动物组织中的残留，胶体金检测试纸更具优势。

发明内容

本发明的目的是提供一种氟苯尼考和替米考星双联检测试纸及制备方法和应用，以解决上述现有技术存在的问题，该试纸为能同步检测氟苯尼考和替米考星的胶体金免疫层析双联试纸，具有简便、快速、灵敏、准确等优点，可实现现场实时检测。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种抗氟苯尼考的单克隆抗体的制备方法，采用戊二醛法将抗氟苯尼考半抗原与载体蛋白BSA进行偶联，合成FF-BSA；再用所述FF-BSA免疫小鼠，得到抗氟苯尼考的单克隆抗体。

本发明还提供一种所述的制备方法制备的抗氟苯尼考单克隆抗体，所述抗氟苯尼考单克隆抗体的重链可变区基因序列如SEQ ID NO：1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；轻链可变区基因序列如SEQ ID NO：3所示，氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。

本发明还提供一种抗替米考星的单克隆抗体的制备方法，采用琥珀酸酐法将替米考星半抗原与载体蛋白BSA进行偶联，合成TIL-BSA；再用所述TIL-BSA免疫小鼠，得到所述抗替米考星的单克隆抗体。