[发明专利]一种氟苯尼考和替米考星双联检测试纸及制备方法和应用

权利要求书

1.一种抗氟苯尼考的单克隆抗体的制备方法，其特征在于，采用戊二醛法将氟苯尼考半抗原与载体蛋白BSA进行偶联，合成FF-BSA；再用所述FF-BSA免疫小鼠，得到所述抗氟苯尼考的单克隆抗体。

2.一种根据权利要求1所述的制备方法制备的抗氟苯尼考单克隆抗体，其特征在于，所述抗氟苯尼考单克隆抗体的重链可变区基因序列如SEQ ID NO：1所示，氨基酸序列如SEQID NO：2所示；轻链可变区基因序列如SEQ ID NO：3所示，氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。

3.一种抗替米考星的单克隆抗体的制备方法，其特征在于，采用琥珀酸酐法将替米考星半抗原与载体蛋白BSA进行偶联，合成TIL-BSA；再用所述TIL-BSA免疫小鼠，得到所述抗替米考星的单克隆抗体。

4.一种根据权利要求3所述的制备方法制备的抗替米考星单克隆抗体，其特征在于，所述抗替米考星单克隆抗体的重链可变区基因序列如SEQ ID NO：5所示，氨基酸序列如SEQID NO：6所示；轻链可变区基因序列如SEQ ID NO：7所示，氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示。

5.一种氟苯尼考和替米考星双联检测试纸，其特征在于，包括权利要求2所述的抗氟苯尼考单克隆抗体和权利要求4所述的抗替米考星的单克隆抗体。

6.根据权利要求5所述的氟苯尼考和替米考星双联检测试纸，其特征在于，还包括：检测膜、结合垫、样品垫、吸水垫和支撑板，所述检测膜粘贴于所述支撑板中央，所述结合垫和所述样品垫依次粘贴于所述检测膜的样品端，所述吸水垫粘贴于所述检测膜的另一端。

7.根据权利要求6所述的氟苯尼考和替米考星双联检测试纸，其特征在于，所述结合垫上负载有所述抗氟苯尼考单克隆抗体和抗替米考星单克隆抗体。

8.一种根据权利要求5-7任一项所述的氟苯尼考和替米考星双联检测试纸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：将权利要求1中所述的FF-BSA、权利要求3中所述的TIL-BSA和兔抗小鼠IgG分别喷点于硝酸纤维素检测膜中央，形成检测线T1、检测线T2和质控线C印迹，制得检测膜；

步骤2：将抗氟苯尼考单克隆抗体和抗替米考星单克隆抗体两种金标抗体喷点于玻璃棉，制得结合垫；

步骤3：将检测膜粘贴于支撑板中央，然后将所述结合垫和样品垫依次粘贴于所述检测膜的样品端，各层间重叠1-2mm；再将吸水垫粘贴于所述检测膜的另一端，与所述检测膜重叠1-2mm，即得所述氟苯尼考和替米考星双联检测试纸。

9.根据权利要求8所述的氟苯尼考和替米考星双联检测试纸的制备方法，其特征在于，所述抗氟苯尼考单克隆抗体效价为1:2.048×10⁶，IC₅₀为1.08ng/mL；抗替米考星单克隆抗体效价为1：2.048×10⁶，IC₅₀为2.31ng/mL。

10.一种如权利要求5-7任一项所述的氟苯尼考和替尼考星双联检测试纸在检测氟苯尼考和替米考星残留中的应用。