[发明专利]采用处理的NC膜及标记物与抗体结合的试纸条的制备方法

权利要求书

1.一种采用处理的硝酸纤维素膜及标记物与抗体结合的试纸条的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：

(a)氧化锌-壳聚糖-标记物制备

1)N-羧乙基壳聚糖的合成：将4.0g壳聚糖加入到含有2.80mL丙烯酸的200mL水中，在50℃下，持续搅拌2天，反应完成后，在反应混合液中加入1mol/L的NaOH溶液，调节溶液的pH值至10-12，使其所有的羧酸全部转化为钠盐，将混合溶液倒入到丙酮中进行重沉淀，然后在水溶液中透析，除去未反应的丙烯酸，透析两天后，冷冻干燥得到N-羧乙基壳聚糖3.6g，产率90%；

2)纳米氧化锌颗粒制备：称取1.3225gZnAc₂·2H₂O溶解在20mL的蒸馏水中，缓慢滴加9mL5mol/L的NaOH溶液，溶液先出现白色浑浊，继续滴加则浑浊完全消失；再加入11mL的蒸馏水，搅拌均匀，然后倒入低压反应釜中，将反应釜放入烘箱中，在170℃下加热12个小时，自然冷却至室温后，得到沉淀后，分别用水和乙醇清洗、离心两次，将沉淀放入烘箱内于60℃烘干备用；

3)N-羧乙基壳聚糖与纳米氧化锌混合溶液的制备：将5.00gN-羧乙基壳聚糖加入到

300mL去离子水中，在室温下剧烈搅拌0.5h，充分溶解得到水溶性壳聚糖溶液，将上述水溶性壳聚糖溶液和纳米氧化锌混合，将混合液剧烈搅拌3h，使其混合均匀；所述水溶性壳聚糖溶液和纳米氧化锌的混合比例是，N-羧乙基壳聚糖与氧化锌的质量之比为100/5、100/8或100/10；

4)标记物的制备：包括胶体金、荧光微球和量子点的制备；

5)氧化锌-壳聚糖-标记物制备：以苯二甲醛作为交联剂，在常温下进行交联，交联结束，将所得的氧化锌-壳聚糖-胶体金或荧光微球或量子点洗涤，真空干燥24h；

(b)氧化锌-壳聚糖-标记物交联标记抗体：取1ml氧化锌-壳聚糖-胶体金或荧光微球或量子点悬浮液，超声分散均匀，然后边搅拌边滴加抗体，加入抗体后，反应1min后，再到超声波上超声20-40秒，然后再反应1小时，加BSA进行封闭1小时，封闭好后进行离心，速度为10000r/min，15min，将保存液加入到离心后的液体中，使其分散均匀，待用；

(c)将硝酸纤维素膜用聚多巴胺处理液预处理后，喷点GDF-15抗体作为检测线，喷点羊抗鼠IgG抗体作为质控线，制得免疫硝酸纤维素膜；

(d)将预处理的样品垫、步骤(b)制备的氧化锌-壳聚糖-标记物标记抗体的玻璃纤维

膜、步骤(c)制备的免疫硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在胶板上，切裁制得检测试纸条，最后将检测试纸条装入塑料外壳；

步骤(c)所述的聚多巴胺处理液，聚多巴胺浓度为0.1-3%，经0.22μm滤膜过滤，备用。

2.根据权利要求1所述的一种采用处理的硝酸纤维素膜及标记物与抗体结合的试纸条的制备方法，其特征在于：所述步骤(a)氧化锌-壳聚糖-标记物制备中，1)N-羧乙基壳聚糖的合成，在水溶液中透析时，采用的透析膜截取分子量为8000-12000g/mol。

3.根据权利要求1所述的一种采用处理的硝酸纤维素膜及标记物与抗体结合的试纸条的制备方法，其特征在于：所述步骤(a)氧化锌-壳聚糖-标记物制备中，2)纳米氧化锌颗粒制备，缓慢滴加9mL 5mol/L的NaOH溶液，该NaOH溶液为新配制的溶液。

4.根据权利要求1所述的一种采用处理的硝酸纤维素膜及标记物与抗体结合的试纸条的制备法，其特征在于：所述步骤(a)氧化锌-壳聚糖-标记物制备中，4)标记物的制备包括胶体金的制备：将装有99ml纯化水的圆底烧瓶放入电热套指定位置加热，接通电热套电源，加热10分钟后，待烧瓶中的水即将沸腾之时开启转数控制开关，调至400rpm，纯化水液面形成漩涡，并用注射器缓慢将1ml1%氯化金溶液沿漩涡边缘加入，待溶液开始沸腾，没有形成大气泡之前，快速加入1%柠檬酸三钠溶液1.4ml，同时观察颜色变化，白色变黑再渐变为紫色，停止加热，保持磁力搅拌，待溶液冷却到室温后，加水称重补足重量。