[发明专利]一种转肽酶活性的检测方法及检测试剂盒

权利要求书

1.一种转肽酶活性的检测方法，其特征在于：所述转肽酶为转肽酶A，所述检测方法包括如下步骤：

（1）将第一肽底物、第二肽底物与转肽酶A标准品或待测样品分别混合孵育形成肽复合物；其中，所述第一肽底物和所述第二肽底物的质量比为10~150:1；

所述第一肽底物的结构式如式（I）所示：

；

所述第二肽底物的结构式如式（II）所示：

；

（2）通过所述肽复合物上的His标签与支持物上的His标签抗体结合，使所述肽复合物附着在所述支持物上；

（3）向步骤（2）的反应体系中加入能够与生物素结合并能够催化底物显色的酶的复合物以及显色底物，检测反应体系发出的信号值，并根据所述转肽酶A标准品的检测结果评估所述待测样品的酶活性。

2.根据权利要求1所述的转肽酶活性的检测方法，其特征在于，所述能够与生物素结合并能够催化底物显色的酶的复合物为偶联酶的亲和素。

3.根据权利要求2所述的转肽酶活性的检测方法，其特征在于，所述偶联酶的亲和素为辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶或碱性磷酸酶标记的链霉亲和素。

4.根据权利要求1所述的转肽酶活性的检测方法，其特征在于，所述显色底物为3',3', 5', 5', -四甲基联苯胺。

5.根据权利要求1所述的转肽酶活性的检测方法，其特征在于，步骤（3）的具体方法如下：向步骤（2）的反应体系中加入所述能够与生物素结合并能够催化底物显色的酶的复合物，再加入所述显色底物进行反应得到所述反应体系；

将所述转肽酶A标准品的浓度与对应的信号值拟合出标准曲线，将所述待测样品的信号值带入所述标准曲线中并计算出所述待测样品的浓度以评估待测样品的酶活性。

6.根据权利要求1所述的转肽酶活性的检测方法，其特征在于，待测样品的浓度范围为78 ng/mL~2500 ng/mL。

7.根据权利要求5所述的转肽酶活性的检测方法，其特征在于，所得标准曲线公式如式（IV）所示：

y=3.523–3.497/(1+(x/862.6)^1.566) （IV），

式中y表示OD450值-OD630值，x表示转肽酶浓度。

8.根据权利要求1所述的转肽酶活性的检测方法，其特征在于，所述第一肽底物和所述第二肽底物的质量比为80~120:1。

9.根据权利要求1所述的转肽酶活性的检测方法，其特征在于，所述第一肽底物、所述第二肽底物与转肽酶A标准品或待测样品按照等体积投料。

10.一种转肽酶A活性的检测方法，其特征在于：所述检测方法包括如下步骤：

（1）将第一肽底物、第二肽底物与转肽酶A标准品或待测样品分别等体积混合孵育形成肽复合物；其中，所述第一肽底物和所述第二肽底物的质量比为10~150:1；

所述第一肽底物的结构式如式（I）所示：

；

所述第二肽底物的结构式如式（II）所示：

；

（2）将所述肽复合物转移至包被His标签抗体的酶标板上孵育，洗涤除去未结合的肽复合物；

（3）向步骤（2）的反应体系中加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素孵育，洗涤除去未结合的辣根过氧化物酶标记的链霉亲和，然后加入3', 3', 5', 5', -四甲基联苯胺显色底物，采用硫酸终止反应后，检测反应体系发出的OD值，并根据所述转肽酶A标准品的检测结果评估所述待测样品的酶活性。

11.一种用于测定转肽酶活性的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括第一肽底物、第二肽底物和转肽酶A标准品；

所述第一肽底物的结构式如式（I）所示：

；

所述第二肽底物的结构式如式（II）所示：

。

12.根据权利要求11所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括转肽酶A标准品，转肽酶A质控品，式（I）所示第一肽底物，式（II）所示第二肽底物，辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶或碱性磷酸酶标记的链霉亲和素，显色底物，His标签抗体。